双价抗真菌融合基因植物表达载体构建时及转基因烟草的初步检测-作物遗传育种专业毕业论文.docxVIP

甘肃农业大学2008届硕士毕业论文摘要 甘肃农业大学2008届硕士毕业论文 摘要 真菌性病害和杂草危害是造成农作物产量大幅度下降及品质变劣的主要原 因，严重影响着农业生产。在植物抗病基因工程中，通过将抗真菌蛋白基因和抗 除草剂基因导入植物的方法来提高植物对真菌病害和除草剂的抵抗能力已成为 一种直接而有效的途径。随着越来越多的抗真菌蛋白被发现，人们试图采用多基 因共表达的策略将多种抗真菌蛋白基因转入植物，利用其协同作用以提高植物的 抗病能力。但由于受到可选择的载体数目和载体容量的限制，这个目的很难较好 的实现。融合基因技术和多价载体的构建是近几年出现的用于解决这一难题的有 效途径。本研究通过木霉几丁质酶基因(CHI)和p．1，3．葡聚糖酶基因(GLU) 的融合并将其连接到改造好的含有Bar基因的植物表达载体pBll21．Bar上构建 双价植物表达载体pBll21．Bar／Chi．Glu，旨在提高作物抗真菌性病害的能力，同 时降低在农业生产中除草所花费的大量人力和财力。主要结果如下： 1．利用木霉几丁质酶基因(CHI)和p．1，3．葡聚糖酶基因(GLU)构建了融 合基因。 2．将Bar基因插入植物表达载体pBll21中，获得含有抗除草剂Bar基因的 植物表达载体pBll21．Bar。 3．构建了含有融合基因的植物表达载体pBll21．Bar／Chi．Glu，同时构建了两 个单价(CHI和GLU)植物表达载体pBll21．Bar／Chi和pBll21．Bar／Glu。 4．以烟草无菌苗叶片为受体，用农杆菌介导法将pBll21．Bar／Chi．Glu转入烟 草中，以Bar基因作为选择标记，草丁膦(phosphinothricin，PPT)为选择剂进 行筛选，获得了转基因植株。 关键词： 融合基因，几丁质酶，p一1，3一葡聚糖酶，Bar基因，抗真菌 甘肃农业大学2008届硕士毕业论文Summary 甘肃农业大学2008届硕士毕业论文 Summary The harm of fungi and weeds is main reason causing the yield reduction and poor quality of crops．Transferring anti-fungal genes and resistant herbicide genes into plants become direct and efficient way to construct anti··fungal and anti·-herbicide plants and of that has attracted many researchers’attention for its high bio-safety and long duration．With more and more anti-fungal proteins are found and applied，the problem of multi·gene transforming and expression arise．It is difficult to realize the aim for the lack of the capacity and the number of vector．Gene fusion and constructing bivalent expression vector of monocotyledon，as a new technology,is the most efficiently way to solve this problem．In this study,a fusion gene with trichoderma chitinase gene and 9-1，3-glucanase gene Was constructed，and Was transferred corresponding expression vectors to tobacco，against缸gm disease and reducing the cost of manpower and financial which are spent on weed contr01．The main results are as follows： 1．Used two anti-fungal gene，class I chitinase gene and class I D-1，3-glucanase gene constructed two fusion genes． 2．Gene of bar Was inserted into pBI 1 2 1，and obtai