第04章蛋白质化化学最终版.pptVIP

蛋白质的化学 一、蛋白质的元素组成 ②.紫外吸收 （三）氨基酸的分离与分析 1.?自动氨基酸分析仪 1.蛋白质完全酸水解 2.水解液于PH 2上样于钠型阳离子交换柱 3.用PH 3.5 0.2mol/L柠檬酸钠溶液洗脱 4.用PH 4.25 0.2mol/L柠檬酸钠溶液洗脱 5.分析洗脱谱上各峰的位置和面积，与标准氨基酸图谱比较分析 P66 2.?高效液相色谱 3.?离子交换层析 4.?生物质谱 蛋 白 质 的 分 子 结 构 N末端氨基酸分析 A.二硝基氟苯（DNFB）法：P70 B.二甲氨基萘磺酰氯法（DNS-Cl）灵敏度：1?10-9mol。 A.肼解法: 大分子多肽氨基酸顺序的确定：裂解 A.化学裂解法：溴化氰裂解法；羟胺NH2OH裂解法 B.酶裂法:胰蛋白酶，胃蛋白酶等 确定肽段在多肽链中的次序：重叠法 P72 利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。 16肽，Ｎ端H Ｃ端Ｓ Ａ法裂解：ONS PS EOVE RLA HOWT B法裂解：SEO WTON VERL APS HO 重叠法确定序列：HOWTONSEOVERLAPS （一）维持蛋白质构象的化学键 三、蛋白质和多肽合成的基本原理 基因工程合成蛋白质 杂交瘤细胞 蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化，而一级结构没有变化，称为变构效应。 3.蛋白质构象改变与疾病 因蛋白质折叠错误或折叠导致构象异常变化引起的疾病，称为蛋白质构象病。 不同生物与人的Cytc的AA差异数目 4、变性作用的意义 七、蛋白质的免疫学性质 1.抗原，抗原性 2.抗体 单克隆抗体 多克隆抗体 3.蛋白质免疫性质的应用 免疫预防：疫苗 免疫、诊断治疗 视频：蛋白质的盐析 超过滤 2.分子排阻层析 层析的主要设备 双向电泳，2DE （二）蛋白质含量测定 凯氏定氮法 福林（Folin ）-酚试剂法（Lowry法） 双缩脲法 紫外分光光度法 BCA比色法 Bradford蛋白分析法 第一次作业： 1、氨基酸通式 2、氨基酸两性解离定义 3、蛋白质一级结构定义 第二次作业： 1、蛋白质二级结构类型 2、分子病 3、构象病 4、蛋白质的变性定义 3. 密度梯度离心 蔗糖密度梯度 滴加样品 CsCl密度梯度离心 1.电泳法 蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳。 （三）根据电离性质的分离纯化方法 几种重要的蛋白质电泳 *SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。 *等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。 *双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。 视频 等电聚焦 2. 离子交换层析： *亲和层析法： 生物体内有许多高分子化合物，具有和某些对应的专一分子可逆结合的特性。例如，酶蛋白和辅酶、抗原和抗体、激素与其受体等都具有这种特性。这种生物大分子和配基之间形成专一的可解离的络合物的能力称为亲和力。 特点： 1. 高度特异性 2. 可逆行 （四）根据配基特异性的分离纯化方法 三、蛋白质的纯度鉴定、含量测定和结构分析 （一）蛋白质的纯度鉴定 1. 层析法：层析纯 2. 电泳法：电泳纯 3. 免疫化学法：免疫纯 视频：蛋白质含量测定 基因工程药品 （1）.传统的蛋白质药品（如动物激素）： 控制某种物质合成基因 转基因“工程菌” 基因工程药品 基因表达产物 基因工程 发酵 分离提取 从动物组织中提取，生产量小，价格昂贵。 （3）基因工程生产的药品 重组人生长激素 重组人白细胞介素 重组人干扰素 重组人胰岛素 发酵罐 （2）基因工程方法生产药品的方法： 蛋白质结构与功能 第 四 节 一级结构是蛋白质生物学功能的基础 一、蛋白质一级结构与功能的关系 1、一级结构不同，功能不同 2. 一级结构中关健部分相同，其功能相同 ACTH活性必需部分 -丝-酪-丝24丝--谷苯丙-COO- H3N+ 1 2 3 24 31 33 39 -丝-酪-丝24亮--谷苯丙-COO- H3N+ -丝-酪-丝24丝--谷胺苯丙-COO- H3N+ 人 猪 牛 剩2-10％ 丧失活性 活性仍100％ 3.一级结构中“关键”部分变化，其生物活性也改变 例：镰刀形红细胞贫