华支睾吸虫分子分类及其28kugsts原核表达的研究-兽医学;预防兽医学专业论文.docxVIP

r——一l队 r——一 l队 Candidate： Tang Ying Supervisor： ．Prof．Song Mingxin Academic Degree Applied for： Master of Agriculture Speciality： Preventive Veterinary Medicine Date of Final Defence： June，201 1 University： Northeast Agricultural University 吗 黜一目 黜一 目 录 中文摘要 I 英文摘要 II l弓I言 ．1 ● 1．1华支睾吸虫分类及遗传变异的研究进展 l 1．1．1后睾科吸虫的传统分类 ．1 1．1．2分子生物学分类技术 。1 1．1．3分类基因的研究进展 ．4 1．1．4系统发生树 。6 1．2华支睾吸虫重组蛋白的研究进展 6 1．2．1华支睾吸虫几种重要的重组蛋白 ．6 1．2．2华支睾吸虫28ku GSTS的研究进展 。8 1．3研究的目的和意义 ．9 2材料与方法 。1l 2．1材料 ．1 1 2．1．1虫1本 1l 2．1．2菌株与载体 l l 2．1．3主要试剂 11 2．1．4主要溶液的配制 ．11 2．1．5主要仪器设备 13 2．1．6主要应用软件 1 3 2．2方法 ．13 2．2．1不同地区华支睾吸虫分类基因的克隆 13 2．2．2不同地区华支睾吸虫分类基因的序列分析 16 2．2．3华支睾吸虫重组28ku GSTs的原核表达 17 3结5是 。22 3．1分类基因的PCR扩增及阳性质粒鉴定 。22 3．1．1不同地区华支睾吸虫ITSl基因PCR扩增及阳性质粒的鉴定 22 ‘ 3．1．2不同地区华支睾吸虫COX2基因PCR扩增及阳性质粒的鉴定 。23 3．1．3不同地区华支睾吸虫NAD3基因PCR扩增及阳性质粒的鉴定 ．25 P． 3．2分类基因序列的测序 ．．．． 27 3．2．1不同地区华支睾吸虫ITSl基因序列的测序 ．．27 3．2．2不同地区华支睾吸虫COX2基因序列的测序 28 3．2．3不同地区华支睾吸虫NAD3基因序列的测序 30 3．3分类基因序列分析 ．．3l 3．3．1不同地区华支睾吸虫ITSl基因序列分析 ．31 东北农业大学农学硕士学位论文3．3．2不同地区华支睾吸虫COX2基因序列分析 东北农业大学农学硕士学位论文 3．3．2不同地区华支睾吸虫COX2基因序列分析 32 3．3．3不同地区华支睾吸虫NAD3基因序列分析 32 3．4华支睾吸虫各基因组构建的进化树 。33 3．4．1不同地区华支睾吸虫ITSl基因序列构建的进化树 33 3．4．2不同地区华支睾吸虫COX2基因序列构建的进化树 ．．． 。33 3．4．3不同地区华支睾吸虫NAD3基因序列构建的进化树 33 3．5华支睾吸虫重组28ku GSTs的原核表达 ．35 3．5．1华支睾吸虫28ku GSTs基因PCR扩增及阳性质粒的鉴定 ．．35 3．5．2华支睾吸虫28ku GSTS基因序列的测序 。36 3．5．3华支睾吸虫pET-32a(+)-GSTs重组表达质粒的构建 ．37 3．5．5间接ELISA抗原包被浓度和血清稀释度的确定 ．．39 ，—1111 3．5．4华支睾吸虫pET-32a(+)-GSTs重组表达质粒在大肠杆菌中的表达 ．38 3．5．6重组蛋白的Western blot分析 ．39 4讨论 ． ．zIl 4．1华支睾吸虫分子分类 。41 4．2华支睾吸虫重组28ku GSTs的原核表达 4l 5结论 。43 ji定 谢 ．zLdI 参考文献 45 攻读硕士学位期间发表的学术论文 。49 J ， ContentsCoNTENTS Contents CoNTENTS Chinese Abstract ·I English Abstract ·II 1 Introduction 。1 I 1．1 Research advances on classification and autogenous variation of Clonorchis sinensis ．1 1．1．1 Research advances on traditional classification of Opisthorchidae 。1 1．1．2 Research advances on methods of molecular taxonomy 一1 1．1．3 Research advances classify gene ·4 1．1．4 Phylogenetic trees 一6 1．2 Research advances on recombination pr