实验三、_唾液值淀粉酶的活性观察.pptVIP

实验三、 唾液淀粉酶的活性观察 指导老师：刘建昌、池雪林 一、目的 掌握温度、pH、激活剂和抑制剂如何影响酶的催化活性及其影响机理。 二、原理 酶是由活细胞分泌的生物催化剂。 酶促化学反应进行的能力即称为酶活性（酶活力） 在一定条件下，能使酶活性达到最高时的温度即酶的最适温度 而能使酶活性达到最高时的pH即酶的最适pH 能使酶由无活性变为有活性或使酶活性增高的物质称为酶的激活剂 能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂。 本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受理化因素影响的情况。唾液中含有唾液淀粉酶，唾液淀粉酶的底物是淀粉。淀粉在该酶的催化下会随着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。而碘液能指示淀粉的水解程度。 三、试剂及器材 （1）0.5％（w/v）淀粉溶液 要求新鲜配制。 （2）稀碘溶液 （3）不同pH溶液 ①pH 5.0缓冲液 ②pH 6.8缓冲液 ③pH 8.0缓冲液 （4）0.5％（w/v）蔗糖溶液 （5）斑氏试剂 （6）1％（w/v）NaCl溶液 （7）1％（w/v）CuSO4溶液 （8）白瓷板（或比色板） （9）恒温水浴锅 （10）电炉? 四、操作 1..唾液淀粉酶应用液的制备 （1）每人取一个干净的饮水杯，装上蒸馏水。 （2）先用蒸馏水漱口，将口腔内的食物残渣清理干净。 （3）口含约20mL蒸馏水，做咀嚼动作1-2min，以分泌较多的唾液。然后将口腔中的唾液吐入一个干净的小烧杯中。 2．温度对酶活性的影响 （1）取3支试管，按表4-2进行实验。 3．pH对酶活性的影响 （1）取3支试管，按表4-3编号后进行实验。 4．酶的专一性 （1）取2支试管，按4-4编号后进行实验。 * * 淀粉 糊精 麦芽糖 + 少量葡糖 淀粉酶 淀粉酶 紫红、暗褐或红色 加碘 （蓝色） 棕黄色 0.5 0.5 0.5 pH 6.8缓冲液(mL) 沸水浴 37℃水浴 冰水浴 不同温度（℃） 0.5 0.5 0.5 稀释唾液(mL) 5 5 5 0.5％淀粉(mL) 3 2 1 试管管号 （2）在干净的比色板上，于各孔分别滴2滴碘液。 （3）每隔1min从第2支试管中取反应液1滴，与比色板孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。 （4）待第2支试管中的反应液与碘液混合后颜色不再变化时，取出试管，向各试管滴加碘液3滴。观察记录各管颜色。说明温度对酶活性的影响。 10 10 10 稀释唾液(滴) 2 — — pH8.0 — 2 — pH6.8 — — 2 pH5.0 不同pH的缓冲液（mL） 2 2 2 0.5％淀粉(mL) 3 2 1 管号 摇匀后，将各管置37℃水浴中处理。 （2）每隔1min从pH6.8的试管中取1滴反应液滴于白瓷板上，随后滴加稀碘液1滴，观察颜色变化。 （3）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液3滴。观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度。解释pH对酶活性的影响。 （2）将各管摇匀后，一起放入37℃水浴处理10min。 （3）取出试管，分别加入斑氏试剂2ml,混匀。 （4）将各管置于沸水浴中煮沸10-20min。观察并解释结果。 1 1 稀释唾液(mL) 2 — 0.5%蔗糖(mL) — 2 0.5％淀扮(mL) 2 1 管号 *