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植物类中药提取物的研究与发展 报告人：荣振旭 植物组织培养生产紫杉醇的研究进展 紫杉醇的药用价值 紫杉醇紫杉醇是一种高效、低毒、广谱、作用机制独特的抗癌天然植物药物，能够治疗多种癌症，需求量大。［2］ 紫杉醇的组织培养 由于存在资源不足、生长缓慢、化学合成复杂等原因，组培技术成为紫杉醇提取的最佳途径。 从红豆杉的外植体中诱导出愈伤组织进行培养［3］，当愈伤组织经过长期固体培养表现出稳定特性后进行悬浮培养［4］，最后进行紫杉醇细胞的大规模培养。 紫杉醇的胞外分泌原理 第一种说法：由于NH+4摄取的增加,细胞内的pH值升高,引起了紫杉醇的外泌。 第二种说法：由于长时间培养后,培养液内碳源、氮源、磷等消耗殆尽,有害物质积累,细胞生长停止、老化、部分细胞死亡、裂解,造成紫杉醇外泌。 利用改变细胞膜透性,促使紫杉醇外泌,再移走紫杉醇,降低培养液内的紫杉醇浓度,促使细胞合成更多的紫杉醇。 提高紫杉醇产量的方法 前体饲喂 通过增加底物量来加快反应速度和提高产率,还能够反馈抑制分支路径促进反应有利于提高紫杉醇的产量。 添加抑制剂 反馈抑制分支路径使反应有利于紫杉醇合成 添加诱导子 通过刺激植物防卫系统而促进紫杉醇的代谢。 紫杉醇的检测方法 紫杉醇的检测方法基本采用HPLC（高效液相色谱法）法进行检测。 蛇足石杉的组织培养与研究 蛇足石杉碱甲的药效和价值 治疗老年性痴呆症、治疗重症肌无力和小儿麻痹症，提高记忆力［5］。由于合成成本高昂，化学合成又无法实现产业化，导致蛇足石杉资源非常珍贵。 蛇足石杉碱甲的组织培养 该方法包括选择外植体、杀灭表面菌、接种培养、杀灭内生菌、扩繁培养和生根培养等［6］。该方法简便易行，效率高，有效地抑制了蛇足石杉外植体的污染和褐化，促进了外植体的存活生长，成本低，实现了蛇足石杉的人工大量栽培。 蛇足石杉碱甲的检测与含量测定 采用HPLC法，重复进样3次，以外标峰面积法计算石杉碱甲的平均含量［11］。 组培快繁方法在藏红花上的应用 藏红花素的药效 有抗癌、消炎、镇静、祛痰、解痉的作用，用于胃病、麻疹、发热、黄胆、肝脾肿大等的治疗。 藏红花培快繁种球（苗）技术的原因 栽培不能结实；球茎繁殖，继代栽培变小，开花少且小；传统球茎繁殖较慢；带毒种球种植造成委花，产量低。 藏红花的组织培养 诱导出不同类型的藏红花愈伤（普通愈伤、胚性愈伤等），在相应的生物反应器（鼓泡式、周期浸没式、雾化反应器等）中进行大规模培养，最终大量生长出藏红花种球和种苗直接用于大田种植，球茎还可经适度脱水，长时间保藏。［7］ 最终，得到优质、脱毒、藏红花素含量高的藏红花种球（苗）。 七叶一枝花的研究与测定 七叶一枝花的药用价值 清热解毒，消肿止痛，治疗蛇毒和癌肿；常用于治疗流行性腮腺炎，扁桃体炎，咽喉肿痛，乳腺炎，跌损伤，毒蛇咬伤，疮痈肿痛等病症。是云南白药的成分之一。 七叶一枝花培育的现状 种子收获量小，种子繁殖出苗率极低，种子培育过程烦琐，生长速度慢，同时保护七叶一枝花的野生资源。因此，利用组培快繁技术，实现人工栽培是最好的解决方法。 七叶一枝花的检测 采用HPLC-UV法测定七叶一枝花中的甾体皂苷。 紫草中紫草素的研究与测定 紫草中紫草素的提取 紫草素主要存在于细胞内，部分存在于细胞外，约30%。只有外泌的才可以收集利用。 为增加外泌量，吕华等［9］采用固定化培养法，此种方法的细胞生长缓慢，但细胞能保持分裂达50天，相对色素外泌量70%，优于悬浮培养细胞的30%。随着细胞内色素积累产生反馈抑制作用，不利于固化培养；以正十六烷处理固化细胞促进产物释放，使细胞色素合成长达80天之久，高于悬浮细胞。[10] 紫草的药效和价值 抗生育作用、抗菌、抗炎、抗癌、降糖、保肝及提高肌体免疫功能。 紫草素的含量测定 紫外分光光度法及薄层扫描可测定紫草素的含量而高效液相色谱法测定紫草中的左旋紫草素的含量, 结果准确、重现性好、灵敏度高。通过配置对照品溶液和供试品溶液，进行检测得出紫草素的含量均值为1.78%［8］。 参考文献 [1] 华君.中药提取物产业现状及中国企业发展策略[C].西南财经大学：华君，2005.1～46. [2] 邓立新.抗癌新药紫杉醇简介.化学教学[M],2006年，第1期. [3] 王蒂.植物组织培养.中国农业出版社，2004年6月第一版. [4] 胡凯,何颖,祝顺琴,谈锋,唐克轩.红豆杉细胞悬浮培养生产紫杉醇的研究进展.《天然