原生质体融合进技术与基因六改组技术.pptVIP

原生质体融合进技术与基因改组技术 朱继新 原生质体融合技术 原生质体融合技术是一种通过人为的方法，是遗传性状不同的体细胞的原生质体发生融合，并发生遗传重组以产生同时带有双亲性状的、遗产性状稳定的融合子的过程。 真核细胞和原核细胞都可以进行原生质体融合。原生质体融合可以在不同种、属、科，甚至更远缘的微生物之间进行。 原生质体制备 主要是在高渗溶液中加入细胞壁分解酶，将细胞壁分离剥离，结果剩下由原生质膜包住的类似球状的细胞，它保持原细胞的一切活性 影响原生质体制备的因素 （1）菌体的前处理 （2）菌体的培养时间 （3）酶浓度 （4）酶处理温度 （5）破壁时的ph值 （6）渗透压稳定剂 原生质体融合 制备好的二亲本原生质体可通过融合剂的作用进行融合，融合剂有化学融合剂和物理融合剂。现在普遍采用的是PEG（聚乙二醇）介导的化学融合法。 影响原生质体融合的因素 （1） PEG （2）无机离子 （3）温度 （4）亲株的亲缘关系 （5）原生质体的活性 （6）细胞浓度 原生质体再生 融合后的原生质体在加稳定剂的再生培养基上能重新形成细胞壁，恢复正常的细胞形态，并能生长繁殖，形成菌落。 影响原生质体再生的因素 （1）菌种本