基于“引经”理论探索麝香酮对外源性大鼠骨髓间充质干细胞在体内迁移的作用及其机制-中医骨伤科学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中 文 摘 要1 ABSTRACT 2 英文缩略词表4 前 言5 一、立题依据6 1 中药麝香及其有效成分麝香酮的研究进展6 1.1 中药麝香概述6 1.2 中药麝香的现代药理学研究现状6 1.3 麝香酮研究现状7 2 中医学引经理论研究现状8 2.1 中医引经理论的历史沿革8 2.2 引经药的作用8 2.3 中医引经理论的现代研究进展9 3 骨髓间充质干细胞研究进展 10 3.1 骨髓间充质干细胞概述 10 3.2 骨髓间充质干细胞体外分离培养与鉴定 11 3.3 骨髓间充质干细胞迁移的研究进展 13 3.4 骨髓间充质干细胞在骨修复领域的应用 14 HYPERLINK \l _TOC_250000 4 SDF-1/CXCR4、MCP-1/CCR2 与 BMSCs 迁移机制的相关研究 15 4.1 SDF-1/CXCR4 趋化信号轴与 BMSCs 迁移的相关研究 15 4.2 MCP-1/CCR2 趋化信号轴与 BMSCs 迁移的相关研究 16 5 前期研究基础 16 6 研究内容 17 7 拟解决的关键问题 17 二、实验研究 18 技术路线图 18 1 实验材料 19 1.1 动物 19 1.2 实验主要药物、试剂、设备 19 1.3 主要试剂的配制 20 2 实验方法 21 体外培养 BMSCs 21 BMSCs 的鉴定 21 2.3 动物分组 22 2.4 建立颅骨骨缺损模型 23 2.5 回植细胞 23 2.6 细胞回植后对模型大鼠进行药物干预 23 2.7 取材、制备标本 23 2.8 骨缺损部位 HE 染色 23 2.9 免疫组化染色检测骨缺损处 SDF-1、MCP-1 表达 24 2.10 原位杂交检测骨缺损处 CXCR4、CCR2 表达 24 2.11 统计学分析 25 3 实验结果 25 3.1 相差倒置显微镜观察 BMSCs 的形态 25 3.2 细胞表型鉴定结果 26 3.3 BMSCs 成脂、成骨诱导结果 26 3.4 骨缺损标本切片 HE 染色后病理观察 27 3.5 骨缺损模型大鼠颅骨 SDF-1 和 MCP-1 的表达 27 3.6 骨缺损模型大鼠颅骨 CXCR4 和 CCR2 的表达 29 三、讨论 32 1.骨髓间充质干细胞在骨修复研究中的应用价值的探讨 32 2.麝香酮促进外源性大鼠 BMSCs 在骨缺损模型大鼠体内迁移的机制 32 3.中医引经理论初探 33 四、结语 35 1 结论 35 2 存在的问题与展望 35 2.1 存在的问题 35 2.2 展望 35 五、参考文献 37 致 谢 44 附录 1 实验相关图片 45 附录 2 实验动物质量合格证 47 附录 3 动物实验设施使用证 48 附录 4 参研课题及学术交流 49 基于“引经”理论探索麝香酮对外源性大鼠骨髓间充质干细胞在体内迁移的作用及其机制 基于“引经”理论探索麝香酮对外源性大鼠骨髓间充质干细胞在体内迁移的作用及其机制 PAGE 1 PAGE 1 万方数据 中 文 摘 要 目 的 ： 研 究 不 同 浓 度 麝 香 酮 对 外 源 性 大 鼠 骨 髓 间 充 质 干 细 胞 （ Bone mesenchymal stem cells，BMSCs）在骨缺损模型大鼠体内迁移能力的影响，观察 其对模型大鼠骨缺损处单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein1， mcp-1）及其受体 CCR2 和基质细胞衍生因子-1（stromal cell derived factor-1， SDF-1）及其受体 CXCR4 表达的影响；将中医引经理论与细胞学相结合，旨在 探索中医引经理论与干细胞迁移学说之间的联系，为其迁移机制提供理论依据， 从现代医学角度来论证中医引经理论并进一步阐释其内涵实质。 方法：采用贴壁筛选法体外培养大鼠 BMSCs，通过细胞形态学观察、成脂 成骨诱导、细胞表型鉴定等方法鉴定 BMSCs。建立大鼠颅骨骨缺损模型，模型 成功后回植体外培养的 BMSCs。将模型大鼠按随机数字表法分为高、中、低及 空白对照组四个浓度组，并按各组剂量灌服麝香酮，对照组灌服等量生理盐水； 每天一次，连续灌服 14 天后处死大鼠取出造模部位颅骨，并脱钙、制作切片； 采用免疫组化染色法观察骨缺损部位趋化因子 SDF-1、MCP-1 的表达；通过原位 杂交技术观察与之相应的趋化因子受体 CXCR4、CCR2 表达的变化，在普通光 学显微镜下观察、拍照记录，每个切片随机选取 4 个视野，所得照片用 IPP6.0 软件计算 IOD 值，进行统计学分析。 结果：经体外培养纯化的大鼠 BMSCs 呈均一的长梭形成纤维细胞样漩涡状 盘旋排列、贴壁生