微生物的培养对与应用.pptVIP

* 课题1 微生物的实验室培养 了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。 一、课题目标： 掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。 无菌技术的操作。 二、课题重点和难点： 三、技能目标： 课题1 微生物的实验室培养 基本操作程序 1、培养基的配制 2、培养基、器具的灭菌 3、倒平板 4、微生物的接种 5、微生物的培养 6、菌种的保存 一、微生物的实验室培养 一、微生物的实验室培养 ㈠ 培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称培养基。 一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质，如：生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等要求。 培养基的基本成分 液体培养基： 培养基的种类 1.按物理状态分 固体培养基： 2.按原料来源分 合成培养基 天然培养基 半天然培养基 3.按用途分 选择培养基 鉴别培养基 加富培养基 ㈠ 培养基 在液体培养基的基础上再添加琼脂。 半固体培养基： 增菌 纯化，增菌 动力检测，保种 ㈡ 无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵。 消毒： 无菌技术的种类 灭菌： 使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的微生物。 将培养皿、接种用具进行灭菌； 使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。 对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒； ㈡ 无菌技术 接种的过程要在酒精灯附近进行。 单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子 杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒 低效消毒法 超声波、碘类、醇类、酚类 杀灭除芽孢外的致病微生物 中效消毒法 紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等 杀灭一切致病微生物 高效消毒法 物理法：热力、辐射、微波、等离子体 杀灭一切微生物 灭菌法 方法 定义 分类 化学法：醛类、烷化剂 常用的消毒与灭菌的方法 ㈡ 无菌技术 1.灼烧灭菌： 常用的消毒与灭菌的方法 2.干热灭菌： 3.高压蒸汽灭菌： 接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的燃烧层中进行充分灼烧灭菌。 将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160～170℃中加热1～2h即可。 将需灭菌物品放到盛有水的高压灭菌锅内煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压达100kPa，温度达121℃后，维持15～30min即可。 ㈡ 无菌技术 二、实 验 操 作 ㈠ 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 定溶至100mL 水 20g 5g 10g 5g 重量 琼脂 NaCl 蛋白胨 牛肉膏 物质 2.称量 按比例称取各种物质。 注意：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。 3.溶化： 4.灭菌： 5.倒平板： ㈠ 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加水定溶至100mL。 将配制好培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（3～5套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。 待培养基冷却到50℃左右时倒平板。 倒平板操作的讨论 1.培养基灭菌后要冷却到50℃时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？ 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 倒平板操作的讨论 ㈡ 纯化大肠杆菌 微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。 1.平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 在数次划线后可以分离到由一