粗糙脉胞菌顺序字四分子分析.pptVIP

实验六粗糙脉胞菌顺序四分子分析 实验目的 1.了解粗糙脉胞菌的生活周期及特性； 2.学习粗糙脉胞菌的培养方法和杂交技术； 3.学习顺序四分子的遗传学分析方法，进行有关基因与着丝点距离的计算和作图。 实验材料 1．粗糙链孢霉野生型菌株，Lys+，分生孢子粉红色； 2．粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株，Lys-，分生孢子白色。 实验原理 本实验用赖氨酸缺陷型与野生型杂交，得到的子囊孢子分离为4个黑色的（+）和4个灰色的（-）。 黑色孢子为野生型，赖氨酸缺陷型孢子成熟迟，在野生型孢子成熟变黑时，还未变黑，而呈浅灰色； 根据黑色孢子和灰色孢子在子囊中的排列顺序，可知合子在减数分裂时，基因Lys和着丝粒之间发生交换的情况，最终可有两大类型的子囊出现，即第一次分裂分离子囊和第二次分裂分离子囊。 实验原理 实验原理 第一次分裂分离形成的子囊为非交换型子囊； 第二次分裂分离形成的子囊为交换型子囊； 第二次分裂分离子囊的出现，是由于有关的基因和着丝粒之间发生了一次交换的结果。 染色体上两个基因座之间的距离越远，则它们之间发生交换的频率越高。因此，第二次减数分裂分离的子囊越多，说明基因和着丝粒间的距离越远。 实验原理 基因与着丝粒间距离（图距）： 重组率去掉%即为图距，单位为厘摩（cM）。 实验步骤 1.菌种活化 2.杂交接种 3.培养 4.压片观察 实验步骤 4.压片观察： 将附有子囊果的滤纸条放入3%来苏尔溶液10min，杀死孢子，以防止污染实验室； 取一载玻片，滴1~2滴3%来苏尔溶液，然后用接种针挑出子囊果放在载玻片上； 盖上另一载玻片，用手指压片，将子囊果压破； 置显微镜下观察 实验结果 可观察到一个子囊果中散出30~40个子囊； 观察子囊孢子的排列情况； 实验结果 观察一定数目的子囊果，记录每个杂交型完整子囊的类型，并计算出Lys基因与着丝粒间的距离。 1. 填表 2. 列出计算公式及结果 3. 绘制显微镜下观察到的杂交子囊的图 注意！！ 本次实验观察过的载玻片、用过的镊子等物品都需放入消毒液中浸泡10分钟后取出清洗，以防污染实验室！