华蟾素联合他莫昔芬(tam)对卵巢癌a2780细胞生长影响的实验分析-妇产科学专业论文.docxVIP

三峡大学硕士学位论文 三 峡 大 学 硕 士 学 位 论 文 II II 内 容 摘 要 目的：研究华蟾素及他莫昔芬单独、联合用药对卵巢癌 A2780 细胞生长的影响， 以期能为临床卵巢癌患者提供新的辅助治疗方案，并探讨二者是否具有协同效应及其 可能的作用机制。 方法：体外培养卵巢癌A2780细胞，将细胞均随机分为8组：华蟾素组(1组)；他 莫昔芬组(2组)；顺铂组(3组)；华蟾素联合他莫昔芬组(4组)；华蟾素联合顺铂组(5组)； 他莫昔芬联合顺铂组(6组)；华蟾素及他莫昔芬联合顺铂组(7组)；对照组(8组)；以顺 铂为阳性对照，用华蟾素注射液、他莫昔芬单独或联合作用于相应各组细胞，采用四 甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测IC50和细胞生长抑制率，采用流式细 胞术检测细胞周期，Hoechst染色检测细胞凋亡，细胞免疫荧光技术检测细胞雌激素 受体的表达，RT-PCR检测Bax、Bcl-2及芳香化酶mRNA 表达。 结果：(1)药物对细胞表现出抑制作用，其 IC50 分别为华蟾素：0.56 mg/ml；他莫昔 芬：12.69 ug/ml；顺铂：2.80 ug/ml。药物的对癌细胞的生长抑制率随时间延长而增 强，联合用药效果优于单独用药，与化疗药物合用表现出化疗增敏作用。(2)华蟾素 和他莫昔芬对卵巢癌 A2780 细胞表现出凋亡作用(P＜0.01)。(3)华蟾素和他莫昔芬能 上调促凋亡基因 Bax 的基因表达(P＜0.01)，下调抑凋亡基因 Bcl-2 的基因表达(P＜ 0.01)；华蟾素能促进芳香化酶(Aromatase)的基因表达(P＜0.01)，他莫昔芬能抑制芳香 化酶(Aromatase)的基因表达(P＜0.05)。(4)华蟾素使人卵巢癌 A2780 细胞周期停滞于 S 期(P＜0.01)，他莫昔芬可使其停滞于 G0/G1 期(P＜0.01)。 结论：华蟾素及他莫昔芬对卵巢癌 A2780 细胞的生长表现出抑制作用，二者对 化疗药物具有增敏作用。华蟾素和他莫昔芬抑制细胞生长的机制可能与其促进细胞凋 亡有关。 关键词：华蟾素 他莫昔芬 卵巢癌 辅助化疗 PAGE III PAGE III Abstract Objective To study the effects of using cinobufagin and tamoxifen separatelyand and federatively on growth of ovarian cancer A2780 cells, In order to provide new auxiliary therapy for clinical ovarian cancer patients, and discuss whether the two have a synergistic effect and its possible mechanism. Methods The ovarian cancer A2780 cells were cultivated in vitro, and randomly divided into eight groups: Cinobufagin group (group 1); Tamoxifen group (group 2); Cisplatin group (group 3); Cinobufagin combined with tamoxifen group (group 4); Cinobufagin combined with cisplatin group (group 5); Tamoxifen combined cisplatin group (group 6); Cinobufagin and tamoxifen in combination with cisplatin group (group 7); The control group (group 8);Using Cisplatin as positive control, the corresponding action was at the corresponding groups of cells with cinobufagin injection alone, tamoxifen alone and combinations ,to detect IC50 and cell growth inhibition rate using methyl thiazolyl tetrazolium trace enzyme reaction colorimetry, to detect the cell cycle using flow cytomet