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上海歌凡生物科技有限公司 FISH 原位杂交试剂盒说明书 货号C006 原 理: 原位杂交技术（in situ hybridization ）是 以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检 测特异核酸分子的技术。使含有特异序列、经过标记的核酸单链即探针，在适宜条件下与组 织细胞中的互 补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记 探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA 或RNA 分子。 本试剂盒使用敏感性加强型的原位杂交检测方法,具有敏感性强,杂交效率高,背景清晰, 结果可靠的优点.可以检测常规福尔马林固定,石蜡包埋的标本. 试剂盒组成: 产品编号 产品名称 包装 保存温度 C002A 10X 蛋白酶K 2ml -20℃ C002B 预杂交液 2ml -20℃ C002C 封闭液 5ml -20℃ C002D 生物素化鼠抗地高辛 5ml -20℃ C001E FITC 抗体 5ml -20℃ C001F 三乙醇胺水溶液pH8.0 100ml 2-8℃ C001G 20XSSC pH4.5 15ml 2-8℃ C001H 20XSSC pH7.5 15ml 2-8℃ 自备试剂： DEPC、乙酸酐、原位杂交用PBS、RNA Free4%PFA、甘氨酸、甲酰胺、盐酸、二甲苯、 乙醇、DAPI、防淬灭封片剂、指甲油、湿盒、杂交仪、鼓风干燥箱、切片机、漂片机、染缸、 枪头、移液器、口罩、手套。 保存温度：请严格按照说明书上的保存温度保存 有效期：6 个月 探针序列: MBD2 transcript variant 2 5’-CACAAATACAATGGCAAAGCACCAGGGAAG-3’ 实验流程： 一． 细胞爬片或者冰冻切片 1. 冰冻切片厚度 5-8um，用放脱片载玻片；细胞爬片的盖玻片要用多聚赖氨酸处理。 防止脱片。 2. 细胞爬片或冰冻切片均可用下述方法固定：用 RNA Free4% 多聚甲醛室温固定 20-30min，用DEPC 水充分水洗，自然干燥后-20℃冷冻可保存2 周以上。 3. 制作湿盒：用5×SSC(PH:7.5) （35ml ）+ 甲酰胺（35ml ）置于湿盒内。 _____________________________________________________________________ 网址: Tel:021 上海歌凡生物科技有限公司 4. 30%H O 1 份+9 份纯甲醇混合液室温处理10min。DEPC 水洗3 次，每次1min; 2 2 5. 切片置于湿盒内，用0.25%盐酸滴于组织上，常温15min，用DEPC 水洗2 次，每次 1min （盐酸可中和带电荷的碱性蛋白，降低背景） 6. 蛋白酶K 覆盖组织，分子杂交仪中37℃20min 。蛋白酶K 可以消化和暴露被遮蔽的 靶核酸，增加探针的结合效率。 7. 用0.2%或0.1mol/L 甘氨酸洗液洗1min （现用现配），终止蛋白酶