斑马鱼西的性腺发育.ppt

卵巢壁: 由两层被膜构成 ,外层为腹膜 ,内层为白膜。白膜由外到内依次为扁平上皮细胞、 疏松结缔组织、 间质组织和生殖上皮。 产卵板: 白膜中的结缔组织向卵巢内部伸展与卵巢生殖上皮共同构成板层状结构 ,称产卵板 ,是卵子产生的地方。 卵巢腔: 存在于卵巢内部的空腔 ,与输卵管相通。 不同龄雌鱼卵巢发育 0～16日龄: 没有观察到性腺发育情况。 17～22日龄: 原始生殖细胞没有两性分化 ,数 量开始增多 ,并逐渐聚集成团 ,细胞质嗜酸性 ,核较大 ,嗜碱性 ,有一明显核仁。 27日龄: 原始生殖细胞分化为卵原细胞 ,体积变大 ,数量增多 ,成排排列 ,在腹腔后背部分布 ,与肝胰脏相连。 32～57日龄: 卵巢体积较小 ,位于腹腔后背部 ,靠近肝胰脏。卵巢内主要为第 Ⅰ时相卵母细胞 ,细 胞体积小 ,圆形 ,细胞质少 ,有一明显细胞核。核中部有 1～2个核仁 ,核内染色质细丝状 。 62日龄: 主要为第 Ⅱ时相卵母细胞 ,细胞为多角形、 圆形。细胞质较多 ,染色较深 ,为淡紫红色。 核相应增大 ,弱嗜酸性 ,核仁数个 ,靠近核膜内侧分布。卵母细胞外面有一层滤泡细胞。 67～72日龄: 卵巢粗短 ,主要存在第 Ⅱ时相和发育早期的第 Ⅲ 时相卵母细胞。早期第 Ⅲ 时相卵母细胞比第 Ⅱ 时相卵母细胞体积大 ,圆形或椭圆形 ,染色较浅 ,核周细胞质内出现少量空泡。细胞核较大 ,弱嗜酸性 ,核仁多个 ,分布在核膜内缘 ,被染成深蓝色。卵母细胞外周辐射带很薄 ,结构不明显 ,细胞外隐约能看到两层滤泡膜。 77日龄: 以第 Ⅱ、 Ⅲ时相卵母细胞为主 ,大部分第 Ⅲ 时相卵母细胞处于发育中期。中期第 Ⅲ 时相卵母细胞近圆形 ,体积明显增大。胞质的空泡内出现了嗜酸性的卵黄颗粒 ,越靠近细胞核 ,卵黄颗粒越大。卵核体积增大 ,染色较浅 ,核仁多个 ,分布在核膜内缘。随卵母细胞的发育 ,核仁逐渐向核中央移动 ,呈深蓝色。细胞周围辐射带明显 ,并随着细胞体积的增大而增厚 ,细胞外两层滤泡膜发育明显 。 82～90日龄:以第 Ⅲ、 第 Ⅳ时相卵母细胞为主。晚期第 Ⅲ 时相卵母细胞体积较大 ,空泡内充满卵黄。第 Ⅳ 时相卵母细胞由于卵黄物质不断积累 ,细胞体积继续增大 ,圆球形的卵黄颗粒基本充满卵母细胞质。细胞核逐渐由中央向动物极移动。卵巢壁随卵母细胞的数量增多和体积增加而逐渐变薄 ,放射带明显增厚。 成熟小鱼: 卵巢白膜变得很薄。卵巢以第 Ⅴ时相卵母细胞为主 , 也存在有发育早期的卵母细胞。第 Ⅴ 时相卵母细胞已充分发育 , 呈圆球形 , 卵黄颗粒相互融合 , 细胞质中充满粗大的卵黄颗粒 , 散布于整个卵母细胞的胞质内。至此 , 卵母细胞发育成熟 , 不久 , 核膜崩解、消失 , 卵母细胞进入第 2次成熟分裂中期 , 形成次级卵母细胞 ,排到卵巢腔。 产卵后小鱼:卵巢细长 ,结构松散 ,包含有排卵后的空滤泡、 第 Ⅱ时相、 第 Ⅲ时相和第 Ⅳ时相卵母细胞。 人工受精 将鱼放入冰水中，直至不太活动为止。 雌鱼：轻压腹部，卵子流出。收集到小培养皿中。 雄鱼：同雌鱼。加1ml D-hanks液稀释。 将稀释精子加入卵子中。 注意事项（2） 斑马鱼的卵在受精后，约72小时即可孵化，在这段期间内，不需要给予打气，只要放在干净的水中即可孵化。放在解剖显微镜下，即可清楚的看到斑马鱼胚胎发育的整个经过。 卵细胞的分离及培养 用D-Hank’s溶液洗去卵巢周围附带的脂肪、结缔组织及血块等杂质。 将部分卵巢置于一装有新鲜D一Hank’s溶液的培养皿中，用眼科镊小心撕开卵巢外膜并轻轻抖动，同时用另一眼科镊将卵细胞从结缔组织中剥离。 当卵细胞基本从卵巢中分散出来后，用移液管轻轻吹打卵细胞5一10次至卵细胞单个分离。 用D一Hank’S溶液洗涤分离好的卵细胞2一3次。 卵细胞培养取20一30个卵细胞于直径 35mm无菌培养皿中，加人3ml培养液，封口，于培 养箱内27℃、饱和湿度条件下成熟培养18h。 * * 斑马鱼的性腺发育 精巢的组织学结构和不同发育阶段生殖细胞形态 精巢一对，位于腹腔背部两侧，体积较小，以系膜与体壁相联，左右精巢彼此分开，在尾端合并成一条很短的输精管，和一般鲤科鱼类相同。 生殖上皮随着结缔组织向精巢内部延伸，形成许多隔膜，把精巢分成许多不规则的精小叶，从其横切面上可见许多精小叶紧密排列，但没有一定的规律性，精小叶为精巢的实质部分，因其呈管状又可称为精小管。 在精小叶内由许多精小囊组成，随着精巢的发育，精小叶内各精小囊间生精细胞发育不同步，而在同一精小囊内生精细胞发育是同步的。 精小叶中央为小叶腔，小叶腔在精巢内相互连接成网状，最后通到输精管，精原细胞位于精小叶的边缘处，在分化过程中，当生殖细胞在精小囊内发育成为成熟的精子时，精小囊破裂，成熟的精子