十艾滋病西机会性感染及性病实验室检查.ppt

褚云卓 艾滋病机会性感染及性病实验室检查 中国医大一院 检验科 褚云卓 讲授内容 一、机会性感染病原学检查 二、性病实验室检查检查 一、机会性感染病原学检查 1、病毒感染 2、细菌感染 3、真菌感染 4、原虫感染 1、病毒感染 —— CMV感染 细胞学检查 从尿液、脑脊液或受感染的肝、肺、胃等组织标本中，用姬姆萨或瑞氏染色法进行染色，可见核内和（或）胞质内含包涵体的巨大细胞，其周围有一条明亮带。 病毒分离 CMV病毒分离是诊断CMV感染最直接的方法，CMV具有种属特异性。采取新鲜尿液、唾液、子宫分泌液、肝活检或尸检标本、外周血白细胞等，将标本接种于人胚肺二倍体传代细胞株上，培养24h后染色可见包涵体，而细胞病变需2～6周才能查见。虽然病毒的分离能证明有CMV感染的存在，但并不一定能证明与疾病有病原学联系。 1、病毒感染 —— CMV感染 抗体检测 补体结合试验（CF）、间接血凝试验（PHA）、免疫荧光试验（IF）、免疫印迹试验（IB）、酶联免疫吸附试验（ELISA）及放射免疫试验（RIA）等。 全自动快速微粒子酶免疫检测法（MEIA）可对IgG和IgM作出定量分析。 IgM阳性提示患者为现症感染或处于CMV感染活动期。 IgG阳性提示既往感染或潜伏感染。 IgG抗体滴度呈4倍或4倍以上增长时，表示有近期CMV感染。 严重的艾滋病患者血清抗CMV抗体可能阴性，故对艾滋病患者来说，CMV血清学检查阴性不能排除CMV感染。 1、病毒感染 —— CMV感染 抗原检测 早期抗原免疫荧光检查（DEAFF）：将肺泡灌洗液、血液白细胞、尿液沉积物、活检或尸检样本接种于成纤维细胞，培养24小时后用荧光标记的单克隆抗体直接测定CMV的α和β蛋白，该法不仅快速而且敏感性和特异性均较高。 CMV白细胞抗原血症检测： 用免疫细胞化学的方法在外周血白细胞核中对65kDa低基质磷蛋白（65kDalow-matrix phosphoprotein，pp65）进行检测，或利用流式细胞仪荧光标记的单克隆抗体测定白细胞中的CMV抗原，计数细胞病毒抗原的百分比，能提供定量数据。 该方法可在症状出现前检测到CMV病毒，可定量，以预测和区分CMV活动期和无症状感染。可评价抗病毒治疗的效果以及检测中枢神经系统感染的艾滋病患者的脑脊液白细胞中CMV，其检测结果与用白细胞或血浆中CMV DNA扩增结果一致。使早期免疫受抑制或艾滋病患者的活动性CMV感染的诊断成为可能，该方法简便、快速且敏感性高。 免疫组化检查 将外周血白细胞用抗CMV单克隆抗体进行免疫组化染色也可快速作出诊断。免疫荧光检测标本中的CMV早期抗原，阳性时提示CMV活动性感染。 CMV核酸检测 检测和定量CMV DNA以及mRNA 提取外周血白细胞、血浆、血清中CMV DNA，采用套式PCR可诊断活动型MCV感染，利用逆转录PCR技术检测外周血白细胞中MCV mRNA，能够测出完整的病毒复制周期，特异性较普通PCR检测DNA高。 艾滋病患者、器官移植者当处于CMV感染的活动期时，体内含有较高水平的CMV DNA，伴随着临床症状的出现和用药治疗的失败CMV DNA的拷贝数会快速升高。 因此，Rasmussen等用外周血白细胞中的CMV DNA含量来确定艾滋病患者的视网膜炎是否由CMV感染引起。但是，用PCR方法检测CMV DNA还不能判定患者是处于活动期、无症状期还是潜伏期，不能精确评估疾病的进程和用药治疗的效果。 形态学检查 取标本涂片，以姬姆萨和瑞氏染色，镜检可见多核巨细胞和核内嗜酸性包涵体。 病毒分离 在感染最初几天取病损处的水泡液或刮片拭子或组织标本接种于HSV敏感的细胞中，常用的细胞为人胚肾、兔肾细胞、Hela细胞等。接种48～96小时后，如发现有细胞肿胀、变圆、细胞融合等细胞病变现象和特征性的核内包涵体便可作出诊断。 免疫学检测 HSV抗原检测主要是用HSV特异性单克隆抗体，以免疫荧光或ELISA方法直接检测病人组织或分泌物细胞中的HSV抗原，若为阳性则诊断为近期感染HSV。HSV抗体检测虽然是临床上最常用检测HSV感染的一种手段，但艾滋病患者通常会出现假阴性反应。 核酸检测 采用PCR技术，扩增HSV基因组中一段特异性的基因序列，是目前检测速度最快且敏感性最高的方法，但是阴性不能排除含有HSV的可能，因为临床早期获得的某些样本用PCR检测是阴性的，另