基因修饰的bmscs复合胶原-壳聚糖胶原-纳米羟基磷灰石仿生支架体内构建组织工程骨软骨的研究-外科学(骨外)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 中文摘要……………………………………………………………3 Abstract……………………………………………………………5 英文缩略词表………………………………………………………8 前 言……………………………………………………………9 材料与方法…………………………………………………………11 结 果……………………………………………………………17 讨 论……………………………………………………………26 结 论……………………………………………………………29 参考文献……………………………………………………………31 致 谢……………………………………………………………33 综 述……………………………………………………………34 2 基因修饰的 BMSCs 复合胶原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石仿生 支架体内构建组织工程骨软骨的研究 中文摘要 【目的】 探讨TGF-β1和BMP-2基因修饰的骨髓间充质干细胞（BMSCs）复合新型仿生 支架材料胶原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石修复关节软骨和软骨下骨损伤的可 行性，为组织工程化骨软骨的临床应用提供实验依据。 【方法】 联合应用密度梯度离心法及贴壁培养法分离、培养、纯化猪BMSCs，应用TGF- β1和BMP-2重组慢病毒转染的BMSCs，荧光显微镜观察转染率；将转染后细胞分 层复合到胶原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石支架（Col-CS/nHAC-PLA）材料上， 扫描电子显微镜（SEM）检测支架的孔隙率、孔径和BMSCs在支架上的粘附生长情 况，制作猪股骨髁骨软骨损伤的动物模型，并应用复合TGF-β1和BMP-2基因修饰 的BMSCs的支架进行修复。分别在12W、24W取材，观察修复组织的大体情况、苏 木精-伊红染色、碱性磷酸酶染色、阿尔新蓝过碘酸雪夫染色、Ⅱ型胶原免疫组 化染色情况，评价软骨和软骨下骨损伤的修复情况。 【结果】 1、联合应用密度梯度离心法和贴壁培养法可以成功分离、培养、纯化猪 BMSCs，TGF-β1和BMP-2重组慢病毒可成功转染的BMSCs，荧光显微镜下观察到荧 光蛋白表达，间接反映TGF-β1和BMP-2蛋白的表达。 2、Col-CS/nHAC-PLA经SEM检测，其孔隙率都达到80%左右，CS孔径约为30-100 μm之间，HA孔径约为50-120μm之间，符合BMSCs生长所需微环境，SEM还观察到 BMSCs在支架上粘附生长的情况。 3、成功制作猪膝关节骨软骨损伤动物模型，并应用组织工程骨软骨进行修 复。12W时，大体及组织学观察示细胞复合组新生软骨较单纯材料组厚且表面较 平整，新生软骨和软骨下骨连续性好，成骨细胞胞浆中棕色的碱性磷酸酶颗粒较 多，新生软骨基质连续性好，染成棕色的Ⅱ型胶原明显。24W时，大体及组织学 观察示细胞复合组较单纯材料组新生软骨完整且较透明，新生软骨和软骨下骨连 3 续性好且排列规则，成骨细胞及胞浆中棕色的碱性磷酸酶颗粒多，新生软骨基质 连续性好且排列规则，染成棕色的Ⅱ型胶原明显。 4、将修复的组织作为一个整体，进行ODriscoll，Keeley and Salter组织 形态学评分。统计提示实验组在12周和24周时修复骨软骨缺损后的评分要优于对 照组(p0.05)。 【结论】 基因修饰的BMSCs复合胶原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石仿生支架能够有 效修复软骨和软骨下骨的复合损伤，为治疗关节骨软骨损伤提供了新的思路。 【关键词】 骨髓间充质干细胞，转化生长因子β1，骨形态发生蛋白-2，组织工程，胶 原-壳聚糖/胶原-纳米羟基磷灰石支架材料，骨软骨损伤。 4 Primary Experimental Study on In vivo Construction of Tissue-engineered Osteochondral Composite Using A Combination of Biomimetic Scaffold Col-CS/ nHAC-PLA and Gene-transducted bone Mesenchymal Stem Cells Abstract [Objective] To discuss the possibility of TGF-β1 and BMP-2 gene-modified bone Mesenchymal Stem Cells (BMSCs) composite with Col-CS/nHAC-PLA biomimetic scaffold to repair the cartilage and subchondral bone complex injury, in order to provide experimental basis