年生化手考前复习.ppt

酶和辅酶 生物氧化 糖化学及糖代谢 脂化学及脂代谢、生物膜 核酸及核酸代谢 蛋白质及蛋白质代谢 物质代谢调节及激素的作用机制 酶活力计算题 10ml唾液，稀释20倍，取1ml测定淀粉酶活力，测知每5min水解淀粉产生2.5g还原糖,测定其稀释液中蛋白质含量为1mg/ml,计算唾液中淀粉酶的总活力，比活力，转换数(S-1 )。 酶活定义：在最适条件下每分钟水解淀粉生成1g葡萄糖的酶量称为1个活力单位。 葡萄糖分子量180,淀粉酶分子量50000。 糖酵解 DNase I足迹试验 蛋白质结合在DNA片段上，能保护结合部位不被DNase破坏，DNA分子经酶切作用后遗留下该片段(亦称“足迹”)，进而可以确定它的序列。在电泳凝胶的放射性自显影图片上，相应于蛋白质结合的部位没有放射性标记条带。? DNase I足迹试验的实验流程如下：①待检双链DNA分子用32P作末端标记，通常只标记一端；②蛋白质与DNA混合，等两者结合后，加入适量的DNase I，消化DNA分子，控制酶的用量，使之达到每个DNA分子只发生一次磷酸二酯键断裂，并列设置未加蛋白质的对照；③从DNA上除去蛋白质，将变性的DNA加样在测序凝胶中作电泳和放射性自显影，与对照组相比后解读出足迹部位的核苷酸序列。 逆转录酶是一种多功能酶 以RNA为模板合成互补的DNA链，形成RNA－DNA的杂合分子。 具有Rnase H样的活力，水解RNA－DNA的杂合分子中的RNA。 以新合成的单链DNA为模板，合成互补链，形成双链DNA分子。 胰蛋白酶：碱性氨基酸 糜蛋白酶：芳香族氨基酸 （胰凝乳蛋白酶） 羧肽酶：羧基末端肽（小肽） 氨肽酶：氨基末端肽（小肽） AA的活化与搬运—氨基酰tRNA的合成 肽链合成的起始—起始复合物的形成 四个阶段 （70S-mRNA-fMet-tRNA） 肽链的延伸—包括进位,转肽,移位……. 肽键的终止—终止codon 激素由细胞分泌出来，由体液运往各靶器官和靶细胞起作用。 高等动物的激素分三类；含氮类激素、类固醇激素、脂肪酸衍生物激素。 作用机制： 含氮类激素的作用机制——第二信使学说 类固醇激素的作用机制——调节基因表达 一、膜受体—cAMP作用途径 基因工程与蛋白质工程 基因工程是对携带遗传信息的分子进行设计和施工的分子工程，包括基因重组、克隆和表达。 蛋白质工程是指对蛋白质已知结构与功能的认识，借助计算机辅助设计，利用基因定位诱变等技术改造蛋白质。 基因重组是指分子间或分子内发生遗传信息的重新组合，也称为遗传重组（genetic recombination) 或基因重排（gene rearrangement)。重组产物称重组DNA (recombinant DNA)。 黏末端（sticky）和平末端(blunt) 黏末端 末端突出的限制性内切酶酶解反应的产物 可以通过单链尾部的碱基配对，与其他任何具有相同突出序列的末端结合，在连接酶的作用下共价连接在一起 平末端 末端不突出的限制性内切酶酶解片段 基因工程技术上的三大发现： 限制性核酸内切酶的发现? DNA连接酶的发现 基因工程载体的发现 科学家有了对DNA切割与连接的工具(酶)，还不能完成DNA体外重组的工作。因为大多数DNA片段不具备自我复制的能力。所以，为了能够在寄主细胞中进行繁殖，必须将DNA片段连接到一种具有自我复制的DNA分子上。这种DNA分子就是基因工程载体(Vector)。 重组体向宿主细胞的导入 基因的扩增 (amplification) 带有外源DNA片段的重组体分子在体外构成之后，需要导入适当的寄主细胞进行繁殖，才能够获得大量的纯一的重组体DNA分子。 注意：选定的寄主细胞必须具备使外源DNA进行复制的能力，而且还应该能够表达由导入的重组体分子所提供的某种表型特征，这样才有利于转化子细胞的选择与鉴定。 质粒载体 质粒的正常复制依赖于宿主细胞中的聚合酶及其他组分，但其本身含有复制起点用以保证质粒的自主复制 质粒为染色体外的小型环状DNA分子,大小约为2~200kb，通常以多拷贝形式存在与大肠杆菌（宿主）中 Inserting a DNA Sample into a Plasmid 大肠杆菌质粒分子结构 目的基因与载体的连接  限制性核酸