他克莫司对脊髓运动神经元保护作用及相关机制的研点究-外科学专业毕业论文.docx

目 目 录 一、摘要 1 (一)中文摘要 1 (二)英文摘要 5 二、正文 10 第一部分新生大鼠脊髓运动神经元细胞的纯化培养与鉴定 (一)前言(一)日IJ舌 11 0 (二)材料与方法 ．．1 1 1．实验材料 1 1 1．1实验动物 ．1 1 1．2主要试剂 ．11 1．3主要仪器 ．．1 1 2．实验方法 ．12 2．1新生大鼠脊髓运动神经元细胞体外培养 ．．1 2 2．2新生大鼠脊髓运动神经元细胞分类与鉴定 ．．1 2 2．3新生大鼠脊髓运动神经元细胞计数与存活率测定 l 3 2．4统计学分析 ．13 (三)结果 l 3 1．新生大鼠脊髓运动神经元生长状况与形态学变化 l 3 2．新生大鼠脊髓运动神经元免疫学分类鉴定结果 ．．14 3．新生大鼠脊髓运动神经元计数与存活率测定结果 1 5 万方数据 (四)讨论 (四)讨论 1 6 (五)结论 1 8 (六)参考文献 ．1 9 第二部分他克莫司对脊髓运动神经元保护作用的实验研究 (一)前言 2 l (二)材料与方法 2 1 1．实验材料 ．．2 l 1．1实验对象 ．2 1 1．2主要试剂 ．．2 l 1．3主要仪器 22 2．实验方法 ．2 3 2．1他克莫司对脊髓运动神经元细胞作用浓度筛选 23 2．2脊髓运动神经元缺血缺氧模型制备及分组 ．23 2．3免疫荧光染色法观察脊髓运动神经元生长情况 23 2．4四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞活力 ．．24 2．5 RT—PCR法检测各组运动神经元中GAP-43mRNA含量．．24 2．6 Western—blot检测运动神经元p—ERK蛋白的表达 26 2．7统计学分析 ．27 (三)结果 27 1．不同浓度他克莫司对脊髓运动神经元保护作用对比．．27 2．各组脊髓运动神经元生长状况对比及计数分析 ．．29 3．各组脊髓运动神经元活力的改变结果对比 3 O 万方数据 4．脊髓运动神经元中GAP一43和p-ERK蛋白表达分析 4．脊髓运动神经元中GAP一43和p-ERK蛋白表达分析 3 l (四)讨论 33 (五)结论 36 (六)参考文献 3 7 第三部分他克莫司治疗大鼠急性脊髓损伤的实验研究 (一)前言(一)日IJ舌 4 1 (二)材料与方法 4 1 1．实验材料 ．4 1 1．1实验动物 4 l 1．2主要试剂 ．．41 1．3主要仪器 42 2．实验方法 ．42 2．1动物模型的建立与分组 ．42 2．2脊髓损伤区样本处理与制备 43 2．3脊髓组织病理学染色与观察 ．．43 2．4脊髓损伤后生化学指标检测 ．．43 2．5脊髓损伤后运动功能恢复情况评分 ．．44 2．6统计学分析 ．44 (三)结果 ．44 1．各组脊髓组织病理学改变结果 一 44 2．各组脊髓损伤后生化学指标检测结果 ．．45 3．各组脊髓损伤后运动功能恢复情况 ．47 万方数据 (四)讨论 (四)讨论 49 (五)结论 52 (六)参考文献 53 三、综述 57 (一)综述 57 (二)参考文献 ．64 四、附录 71 五、攻读学位期间发表文章情况 73 六、致谢 ．74 万方数据 大连医科大学博士学位论文他克莫司对脊髓运动神经元保护作用及相关机制的研究 大连医科大学博士学位论文 他克莫司对脊髓运动神经元保护作用及相关机制的研究 博士生姓名：杨 林 指导教师：吕德成教授 指导小组：吕德成教授 专业名称：外科学 摘 要 急性脊髓损伤(Acute Spinal Cord Injury，ASCI)是一类非常严重的神经系 统疾病，常导致损伤平面之下的运动和感觉功能全部或部分丧失。脊髓损伤患 者一生需要的治疗费用非常昂贵，治疗效果又不理想，所以给个人和家庭都带来 了巨大的经济和心理负担。因此，怎样提高治疗急性脊髓损伤的效果，恢复或 者减少其所造成的神经功能损害，让患者重新回归到正常的社会生活工作中来， 具有非常重要的意义。 他克莫司(Tacrolimus，FK506)商品名普乐可复，已经通过美国FDA验证， 1984年由日本藤泽制药公司在筑波泥土的链霉菌里提取出来的发酵产物，其属 于大环内酯类抗生素，临床上具有很强的免疫抑制作用。据文献报道，FK506 的受体蛋白FKBP(FK506 Binding Protein)不但存在于免疫系统中，并且在神经系 统内的也极为丰富，并