无机化学 量子点在生物分析中应用.ppt

* 展 望 1、设计水溶性、生物相容性、高荧光效率的量子点仍然有很大发展空间。 2、在高选择性、高特异性标记细胞核生物分子的技术上推陈出新。 3、QDs对活体的长期毒性还有待验证。 4、提高QDs在活体深层组织中的成像技术。 尽管在应用中存在着这些难点，量子点作为一种新的荧光标记物仍将为荧光成像及检测技术带来新的高峰，对细胞生物学、光子学成像及医学领域也将会产生深远的影响！ * Thanks 量子点在生物分析中的应用 * 量子点概述 当半导体材料降至一定临界尺寸后，电子在三维上的运动受到了限制，表现出量子局限效应。这类材料都称为量子点（quantum dots，QDs） 量子局限效应导致费米能级附近的电子能级由连续变为离散能级或能隙变宽，具有类似分子特性的分立能级结构，受激后可以发射荧光。 * 量子点又称为半导体纳米晶（nanocrystals，NCs）、半导体纳米粒子（nanoparticles，NPs） Ⅳ-Ⅳ族：SiC，SiGe； 量子点 种类 Ⅱ-Ⅵ族：CdSe，CdTe，ZnS，MgSe等； Ⅲ-Ⅴ族：GaAs，InAs，GaSb等； Ⅳ族：Si，Ge； Ⅳ-Ⅵ族：PbSe； 单量子点：Au，Pd，Co等； * 量子点的光学特性 宽吸收峰：能吸收所有比它第一发射波长更短的“较蓝”的光。 窄发射峰：具有非常窄且十分对称的荧光发射光谱。 大斯托克斯位移：消除激发光和散射光等背景干扰。 * 光稳定性：抵抗紫外、化学物质、生理代谢对其的降解。 安全：细胞毒性低，可用于活细胞及体内研究。 高量子效率：荧光强度大，发光时间长，便于长期跟踪和保存结果。 * 发射波长尺寸可调：通过控制量子点大小或组成合成任意所需发射波长的量子点，达到同时检测多种指标的要求。 独特优越的光学、电子和表面可修饰性！ * 量子点的应用 光电子学方面的应用：电致发光的光电子器件 80s后期，生物学家开始关注量子点在生物学方面的应用； 1998年，Alivisatos和Nie研究小组的工作： 半导体量子点在生物学研究的应用取得重大突破。 * M. Bruchez, M. Moronne, P. Gin, Weiss, A. Alivisatos. Science. 1998, 281: 2013-2016. 采用两种QDs标记3T3小鼠纤维原细胞。 一种发绿色荧光（2nm）：经TEOS、尿素及乙酸作用后，对细胞核具有很强亲和力； 一种发红色荧光（4nm）：表面经生物素修饰后，与亲和素修饰的肌动蛋白丝发生特异性吸附。 QDs用于荧光生物标记 * QDs用于非同位素标记生物分子的超灵敏检测 Warren C, Nie S M. Science, 1998, 281(5385): 2016-2018. QDs表面连接上巯基乙酸（HS-CH2COOH),从而使量子点既具有水溶性，还能与生物分子（如蛋白质、多肽、核酸等）结合，然后通过光致发光检测出QDs，从而使生物分子识别一些特定的物质。 * A B C original QDs mercapto-solubilized QDs QD-IgG conjugates 转铁蛋白与量子点共价交联，在受体的 介导下发生内吞作用，转移至HeLa细胞 中，证明连接的量子点仍具有生物活性。 * 两个创新点： 发挥QDs的水溶性 将QDs与生物分子的偶联 * 基于QDs与生物分子间的特异性相互作用 构建量子点-生物复合探针 特异性靶向作用 保持荧光强度及稳定性 减少其他分子非特异性吸附 * 量子点的制备 Top-down Bottom-up 晶体表面刻蚀 组成器件 化学制备 生物标记 有机相制备 水相制备 * 前驱体 稳定剂：巯基乙酸、巯基乙醇、2-硫代二乙醇、左旋半胱氨酸等 形成的量子点类型：CdSe传统核型，CdSe-CdS核-壳型，CdTe-CdS-ZnS核-壳-壳型，Eu掺杂CdSe ie：在绝氧的条件下，向以巯基乙酸为稳定剂的CdCl2溶液中引入H2Te气体，通过高温或微波，使量子点快速成核及生长。 阳离子：Zn2+、Cd2+等； 阴离子：Te2-、Se2-等。 * 量子点的表面修饰与生物功能化 1、使用双功能试剂，与量子点表面金属离子配合 * 3、对量子点表面进行硅烷化处理，并嵌入可与生物分子连接的官能团 2、表面修饰有三正辛基氧化磷（TOPO）的量子点先与双亲聚合物的疏水长链以疏水作用力相结合，再通过聚合物的亲水基团与生物分子连接 * 4、在量子点表面修饰带负电荷的基团，通过电荷作用力与带正电的生物分子结合 5、将量子点并入带空隙的微珠或纳米级的微球中，形成胶囊，再通过双功能试剂将微球与生物分子连接 * 生物成像 荧光免疫分析 生物