交叉配血试验课件.ppt

实验二 交叉配血试验 目的 掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。 原理 红细胞表面带有大量的负电荷，凝聚胺溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的集聚。悬浮液具有中和凝聚胺的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；如果红细胞被相应的抗体致敏，则凝集就不会散开，试验结果为阳性。 一、凝聚胺配血法 器材 小试管、滴管、试管架、记号笔、 显微镜、离心机。 试剂 凝聚胺试剂盒。 标本 静脉血。 操 作 1. 标记试管：取试管两支，分别标明主侧次侧， 2. 加样: 主侧管：供血者3～5％悬红1滴+受血者血清2滴 次侧管：受血者3～5％悬红1滴+供血者血清2滴。 3.离心15秒,观察是否凝集 4.各加LIM溶液0.65ml，混匀后，再各加Polybrene溶液2 滴，混匀。 5. 3000r/min离心15秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。 6. 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。 7. 最后加入Resuspending2滴，轻轻转动试管混匀1min内观察结果，看凝集是否散开。 注意事项 1.肝素治疗患者，多加几滴聚凝胺以中和肝素。 2.试剂使用前请放置至室温平衡后再行操作。 3.天冷时，冷凝集素会干扰交叉配血。 4.按说明书操作。 5.先盐水观察，再做聚凝胺法。 目的 掌握抗人球法原理、方法 原理 检查有无IgG抗体 器材 小试管、滴管、试管架、记号笔、显微镜、离心机、37℃水浴箱。 试剂 抗人球试剂（多抗）、生理盐水。 标本 静脉血。 二、抗人球蛋白法配血试验 1.标记试管，标明主侧、次侧 2.加样 主侧管：供血者3～5%悬红1滴+受血者血清2滴 次侧管：受血者3～5%悬红1滴+供血者血清2滴 3.离心15秒,观察是否凝集 4.混匀，37℃水浴30min，盐水洗涤3次（快）， 扣干。 5.加抗人球蛋白试剂1滴，混匀，离心15秒。 6.轻摇，观察结果。 操 作 1.洗涤要迅速，中途不能停，洗彻底。 2.严格把握离心速度和时间。 3.观察结果时，须轻摇。 4.冷凝集素、脐血有网织红细胞、洗涤不充分、抗人球蛋白血清中含有抗运铁蛋白，可使红细胞凝集。 5.先盐水观察，有溶血标本弃用。 6.加阳性、阴性对照。主侧次侧交叉结束后，加1滴阳性对照细胞，离心后应有红细胞凝集，若不凝需重做。 7.抗人球试验费时、繁琐，但灵敏度好、特异性强。 注 意 事 项 思考题 1、哪些因素可影响抗人球蛋白交叉配血试验结果。 2、比较抗人球蛋白和凝聚胺交叉配血试验的原理、方法和异同点。