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星斑川鲽platichthys stellatus小电但导钙激活你型钾通道skca2基因的克隆及免疫功能研究分析
原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进
原创性声明
本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进 行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何 其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡 献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人 承担。
论文作者签名：3籀整 日期： 坐丝±!劫
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(保密论文在解密后应遵守此规定)
论文作者签名： 础导师签名 日期： 塑!丝!』塑
厶f只；硕士学位论文目录
厶f只；硕士学位论文
目录
中文摘要 1
ABSTRACT ．3
缩略词 5
第一章前言 ．．7
1．1离子通道概述 一7
1．2钾离子通道概述 一9
1．2．1钾离子通道的结构 9
1。2．2钾离子通道的分类 ．．11
1．3钾离子通道与鱼类免疫机制研究 16
1．3．1鱼类的免疫机制概述 ．．16
1．3．2钾离子通道在鱼体免疫中的作用 ．．17
1．4小电导钙激活型钾离子通道研究进展 19
1．5本研究的目的及意义 20
第二章星斑川鲽SKCa2基因的克隆与序列的生物信息学分析 ．．23 2．1材料与方法 23
2．1．1实验材料 ．．23
2．1．2实验试剂和仪器 ．．23
2．1．3 SKCa2基因PCR引物设计 24
2．1．4星斑川鲽脑总RNA提取 24
2．1．5 cDNA第一链的合成 ．．25
2．1．6 PCR扩增星斑川鲽SKCa2基因核心片段序列 26
2．1．7 PCR产物纯化 ．26
2．1．8目的片段与T载体连接并转化感受态细胞 ．27
2．1．9挑取单菌落进行阳性检测 ．．27
2．1．1 0测序结果验证 28
2．1．11星斑川鲽SKCa2基因的5’RACE 28
2．1．12星斑川鲽SKCa2基因的3’RACE 30
2．1．13星斑川鲽SKCa2基因的测序结果拼接 ．．32
2．1．14星斑川鲽SKCa2基因序列的生物信息学分析 ．．32
2．2实验结果 32
2．2．1总I矾A的提取 32
．厶芰力互硕士学位论文2．2．2星斑川鲽SKCa2基因核心片段序列扩增
．厶芰力互硕士学位论文
2．2．2星斑川鲽SKCa2基因核心片段序列扩增 32
2．2．3星斑川鲽SKCa2基因的5-RACE和3-RACE 32
2．2．4拼接获取星斑川鲽SKCa2的cDNA全长 33
2．2．5星斑川鲽SKCa2基因的生物信息学分析 34
2．3讨论 ．．41
第三章星斑川鲽SKCa2通道在LPS刺激下的表达模式 ．45 3．1材料与方法 45
3．1．1实验材料 ．．45
3．1．2实验试剂和仪器 ．．45
3．1．3 RT-PCR引物设计 46
3．1．4各组织总RNA提取及cDNA合成 46
3．1．5 cDNA质量检测 一47
3．1．6星斑川鲽SKCa2在不同组织中的表达 47
3．1．7星斑川鲽SKCa2在LPS刺激不同时间后各组织表达模式的变化 48
3．1．8实验数据处理 ．．48
3．2实验结果 48
3．2。1各组织cDNA的质量及RT-PCR引物特异性 ．．48
3．2．2 SKCa2 mRNA在不同组织的相对表达量 ．48
3．2．3 SKCa2 mRNA在LPS刺激不同时间后各组织中的相对表达量变化 49
3．3讨论 一52
第四章星斑川鲽SKCa2在淋巴细胞中的免疫应答机制 一55 4．1材料与方法 55
4．1．1实验材料 ．．55
4．1．2实验试剂和仪器 ．．55
4．1．3星斑川鲽外周血淋巴细胞的制备 ．．56
4．1．4淋巴细胞计数 ．．57
14．1．5 Apamin对淋巴细胞增殖的影响 57
4．1．6星斑川鲽淋巴细胞增殖测定 ．．58
4．1．7星斑川鲽淋巴细胞呼吸爆发活性的测定 ．．58
4．2实验结果 59
4．2．1淋巴细胞的分离与计数 ．．59
4．2．2 Apamin对淋巴细胞增殖的影响 59
4．2．3淋巴细胞增殖测定 ．．60
4．2．4淋巴细胞呼吸爆发活性测定 ．．61
厶it只客硕士学位论文4．3讨论
厶it只客硕士学位论文
4．3讨论 ．62
第五章总结与展望 65
5．1实验总结 65
5．2展望 66
参考文献 ．．69
致谢 ．．79
攻读学位期间发表的学术论文 ．．81
厶f只；硕士学位论文CONTENTS
厶f只；硕士学位论文
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