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第四章 第五节诊断用生物制品制造技术 诊断用生物制品（diagnosticum） 包括诊断用抗原、诊断用抗体（血清）和标记抗体等三类。 该类制剂的最基本要求是特异性强和敏感度高。生物制剂用于诊断的原理(略) 诊断液: 利用细菌、病毒和寄生虫培养物、代谢物、组分（提取物）和反应物等有效物及动物血清等材料制成的，专门用于动物传染病和寄生虫病诊断和检疫的一大类制品。 一、诊断抗原 （一）血清学诊断抗原 血清学诊断抗原是用已知微生物和寄生虫、微生物和寄生虫的组分或浸出物、代谢产物、感染动物组织制成，用以检测血清中的相应抗体 该类制剂可与血清中的相应抗体发生特异性反应，形成可见或可以测知的复合物，以确诊动物是否受微生物感染或接触过某种抗原。 常用的抗原有凝集反应抗原、沉淀反应抗原、补体结合反应抗原和酶联免疫吸附试验（ELISA）抗原等。 1、凝集反应抗原 凝集反应抗原是颗粒性抗原，如细菌和红细胞等。 在有电解质存在条件下，能与特异性抗体结合，形成肉眼可见的凝集现象。 举例: 布鲁氏菌凝集反应抗原、马流产凝集反应抗原、鸡白痢全血凝集反应抗原、猪传染性萎缩性鼻炎I相菌抗原和鸡源支原体平板凝集反应抗原等。 布鲁氏菌凝集反应抗原制造及使用方法 ①菌种 抗原性良好的2～3种布鲁氏菌。菌落须为光滑型。 ②制造要点 将检定合格的种子液，接种于适于布鲁氏菌生长的琼脂扁瓶上(或液体通气培养基)，37℃培养2～3d； 加入适量0.5％石炭酸生理盐水，洗下培养物，经纱布过滤，涂片杂菌检查。 热凝集和吖啶黄凝集试验合格的过滤菌液，在70～80℃水浴中杀菌lh，观察无凝集块出现，离心,将下沉菌体重新悬浮于0.5％石炭酸生理盐水中，此即为浓菌液，置2～10℃冰箱中保存备用。 ③标化 用石炭酸生理盐水将浓菌液稀释为1:20、1:24、1:28、1:32、1:36，5个不同稀释度，将标准阳性血清稀释为1:300、1:400、1:500、1:600、1:700，5个稀释度。 将稀释的抗原和血清排成方阵进行试管凝集试验，每只反应管中加抗原和血清各0.5ml，37℃ 24h观察结果。 观察/测定 当标准阳性血清对标准抗原的凝集价为1:1000“++”时，在血清1:1000稀释度呈现“++”，1:1200呈现“-”，“±”或“+”的凝集现象的抗原最小稀释度，即为浓菌液应稀释的倍数。在下表中(举例)浓菌液的稀释倍数为1:28，此即为标化抗原的初测结果。 然后再以同法作一次测定，如果第二次结果仍为1:28倍，则此批浓菌液作1:28倍稀释，即为使用液。出厂的抗原原液比使用液浓20倍。 菌 液 稀 释 血 清 最 初 稀 释 度 1:300 1:400 1:500 1:600 1:700 加入抗原后的血清稀释度 1:600 1:800 1:1000 1:1200 1:1400 1:20 +++ ++ + - - 1:24 +++ ++ + - - 1:28 ++++ +++ + + ± - 1:32 ++++ +++ ++ + - 1:36 ++++ +++ ++ ++ - 标准抗原 ++++ +++ ++ - - (1:20) ④成品检验 抗原应为乳白色均匀菌液，没有摇不散的凝块或杂质,没有任何细菌生长。对标准阳性血清1:1000倍稀释出现“++”凝集，对阴性血清1:25～1:200稀释均不出现凝集。 2、沉淀反应抗原 沉淀反应抗原为胶体状态的可溶性抗原，如细菌和寄生虫的浸出液、培养滤液、组织浸出液、动物血清和动物蛋白等，与相应抗体相遇，在二者比例合适并有电解质存在时，抗原抗体相互交联形成免疫复合物达一定大时，即出现肉眼可见的沉淀。 沉淀抗原是细胞浸出成分，为细微的胶体溶液，单个抗原的体积小而总面积大，出现反应需要的抗体量多，故试验时常采取稀释抗原加不稀释的血清，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。 沉淀反应抗原分类 由于使用方法不同，沉淀