鸦胆子粗官提物、臭椿粗提物和y-d对tmv、cmv-rna的抑制作用.docx

独创性声明本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完 独创性声明 本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作 了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位c毕业，论文作者亲笔虢粒 吼。暑、口阳 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅：学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。 口 学位(毕业)论文作者亲笔签名： 日期：p譬．。2．7 J 指导教师亲笔签名： 铷 日期： p扩．。6．1 福建农林人学硕士学位论文摘 福建农林人学硕士学位论文 摘 要 烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)在世界范围内都有分布，可侵 染十字花科、茄科、菊科等多种植物，是具有经济重要性的植物病毒之一。黄瓜 花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的寄主十分广泛，能侵染85科1000 多种植物。TMV可以与CMV复合侵染，不仅造成植物品质的下降同时可以造成 巨大的经济损失。TMV、CMV引起的病毒病不但危害严重，其防治也相当困难。 鸦胆子(Bruceajavanica亿．)Merr)、臭椿(Ailanthus altissima Swingle)均系 苦木科(Simaroubaceae)植物果实，为传统中药。在本实验室以前的研究中，已 经得出，在接种TMV 6．8h后的普通烟K326，1．0 mg／mL的鸦胆子和臭椿粗提物 处理的病毒增殖抑制率分别为90．9％和89．4％；分别利用半叶法和叶碟法测定了 鸦胆子素D的抗TMV侵染和增殖作用，结果为，在0．025mg／mL浓度下抗TMV 侵染效果达到75％以上，而在2x10-3mg／mL的浓度下其抗TMV增殖作用仍达到 60％。 Bruticine D(Y_D)、鸦胆子粗提物和臭椿粗提物对TMV有很好的抑制增殖 的作用，为了研究Y-D、鸦胆子粗提物和臭椿粗提物对TMV核酸、CMV核酸在 寄主体内的增殖情况的影响，本实验采用-]semi．quantitive RT-PCR的方法，对 TMV-RNA的复制酶基因、外壳蛋白基因(CP)、运动蛋白基因(MP)、烟草内 参基因(actin gene)和CMV-RNA3分别进行了退火湿度优化、M92+浓度优化、 循环次数优化，进一步研究接种TMV 6h的普通烟K326和接种CMV 12h的假酸浆 (Nicandra physalodes(L．)Gaertner)，用Y-D、鸦胆子粗提物和臭椿粗提物对其 处理48h，检测三种药剂对TMV、CMV的RNA的抑制作用。同时采用quantitive real．time PCR的方法，检测Y-D对TMV-RNA、CMV-RNA的抑制作用，对TMV基 因组、TMv—CP亚基因组和TMV—MP亚基因组的抑制率分别为93．04％、94．79％和 95。820,0。两种方法的结果是相同的，不仅确定了Bruceine D、鸦胆子粗提物、臭 椿粗提物对寄主体内的TMV．RNA的增殖有很强的抑制作用。同时证明了 semi．quantitative RT-PCR实验结果的正确性，证明-了semi—quantitative RT-PCR技 术的可靠性，在相对定量的研究中，由于荧光实时定量PCR仪价格昂贵，当条件 有限时，如果操作得当，半定量PCR法可以替代荧光定量PCR法，得到应用。但对 CMV．RNA的抑制作用从实验结果看是抑制增熵作川不强，似并不能就此断定二三 福建农林大学硕士学位论文种药剂对CMV没有抑制增殖的作用，也就不能做出Bruceine 福建农林大学硕士学位论文 种药剂对CMV没有抑制增殖的作用，也就不能做出Bruceine D、鸦胆子粗提物、 臭椿粗提物三种药剂对+ssRNA病毒在寄主体内不具有广谱的抑制作用，还可以 从蛋白等方面进一步研究药剂的抗病毒作用。 关键词：TMV；CMV；Bruticine D、鸦胆子、臭椿粗提物；抑制作用 福建农林大学硕士学位论文Abstract 福建农林大学硕士学位论文 Abstract Tobacco mosaic virus is distributed in the world．It call infect many kinds of plants of Cruciferae、Sola