地塞米松对人眼小梁细胞通透阻力的影响-眼科学专业论文.docxVIP

中山大学硕二I二学位论文 中山大学硕二I二学位论文 地塞米松对人眼小梁细胞通透阻力的影响 方 法 1．人眼小梁细胞的体外培养和鉴定：用组织块培养法培养正常人及POAG 患者小梁细胞，传代培养永生化小梁细胞株(加拿大Vincent Raymond教授惠 赠)，显微镜观察、免疫组化等方法鉴定小梁细胞。 2．激素处理小梁细胞：将细胞分为对照组和处理组，处理组细胞培养液添加 10。7 mol／L地塞米松进行培养，观察细胞变化情况。 3．小梁细胞通透阻力的检测：将各组小梁细胞接种于细胞培养池(Transwell inserts)的滤膜上，在细胞单层融合后的不同时间点应用EVOM测量单层小梁细 胞的电阻(TEER，trans epithelial electrical resistance)，以评价细胞通透阻力的 大小。 4．小梁细胞AQP．1、Claudin一1表达的检测：应用RT-PCR、Western blot方 法分别从mRNA水平和蛋白水平检测小梁细胞AQP。l、Claudin．1的表达。 结 果 1．成功体外培养正常人眼、POAG患者及永生化小梁细胞，镜一卜-可见： POAG患者与正常人，地塞米松处理组与对照组，滤膜上与传统培养瓶／板上生长 的小梁细胞形态、分布上未见明显差别。 2．TEER测量结果显示正常人眼、POAG患者及永生化小梁细胞单层融合后 两周内的平均电阻值基本稳定，说明该测量体系较为客观稳定。采用重复测量数 据的方差分析方法对测量数据进行整体分析，在不同时间点均发现地塞米松处理 组可使TEER水平提高。 3．RT-PCR结果显示各组小梁细胞在mRNA水平均有AQP一1、Claudin．1的表 达。 lI 中山大学硕：卜学位论文 中山大学硕：卜学位论文 地塞米松对人眼小梁细胞通透阻力的影响 4．Western blot结果显示各组小梁细胞在蛋白水平均有AQP．1、Claudin-1表 达。随着时间的延长各组细胞两种蛋白的表达均呈上升趋势，但相同时间点地塞 米松处理组两种蛋白的表达量明显较对照组高。 结 论 1．滤膜培养体系及应用EVOM对细胞通透阻力的测量体系较为客观稳定， 可作为今后对小梁细胞特性研究的一个新的较好模型。 2．地塞米松可以增加小梁细胞的通透阻力，上调人眼小梁细胞AQP一1、 Claudin一1的表达。小梁细胞通透阻力增加与两种蛋白表达增高之间可能存在相关 性，参与GIG的发病。但其间的确切机制，尚待进一步研究。 关键词：小梁细胞；TEER；地塞米松；水通道蛋白．1；Claudin．1 III Regulation Regulation of Dexamethasone on trans epithelial electrical resistance in human trabecular meshwork cells Zhongshan Ophthalmic Center，Sun Yat—sen University Major： Ophthalmology Candidate： Huang Yalin Supervisor Professor Zhuo Yehong ABSTRACT Objective Although the mechanisms of open angle glaucoma is complicated and not completely known till now．the trabecular meshwork is located as pathological region．The trabecular meshwork is located at anterior chamber angle，and it is the main route for the outflow of aqueous humor．It is composed of perforated sheets of collagen and elastic tissue covered by trabecular meshwork(TM)cells． The expression of related proteins in human trabecular cells may play an important role in the course of glaucoma． In the current study，we investigate the effect of Dexamethasone(Dex)on expression of AQP．．1 and Claudin-·1 and the trans epithelial electrical resistanc