禽流感试验室检测技术方案-中国疾病预防控制中心.PDF

一、实验室网络设置 实验室网络由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中 心和省级流感实验室两级组成。 二、实验室条件及生物安全操作的要求 1 (1)实验生物安全要求：安全Ⅱ级+(BSL-2 级+)或安全Ⅲ级(BSL-3 级)。 (2)特异性 H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测、血清学检测中用到的血凝 抑制实验(HI)可以在安全Ⅱ级+(BSL-2 级+)实验室里操作。 (3)特异性 H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测在安全Ⅱ级+(BSL-2 级+)实 验室的生物安全柜里提取病毒的核酸，进行病毒核酸检测的实验室要求 请参照国家有关核酸检测要求的规定。 (4)微量中和实验、特异性 H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测阳性的采样 标本的病毒分离、尸检标本的检测必须在安全Ⅲ级(BSL-3 级)实验室里 操作。 (5)省级流感实验室实验条件：具备进行禽流感相关临床标本初筛所 需的生物安全柜、离心机、PCR 仪、电泳仪、紫外线检测仪等配套设备。 2 实验生物安全要求：生物安全Ⅱ级+(BSL-2 级+)和生物安全Ⅲ级(BSL- 3 级)实验室。 3 (1)禽流感标本特异性 H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测； (2)禽流感 H5 的血清学检测工作； (3)特异性 H5 的 RT-PCR 病毒核酸检测阳性标本的病毒分离必须在 生物安全Ⅲ级(BSL-3 级)实验室； (4)没有生物安全Ⅲ级(BSL-3 级)实验室的，将标本送国家流感中心 做病毒的分离工作。 4 (1)国家流感中心设立在中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流 感室； (2)对各省报告的禽流感疑似病例或确诊病例进行复核、确认； (3)对不具备禽流感病毒分离条件的省份送检标本的检测、分离和确 认； (4)对需要做微量中和实验的血清标本进行微量中和试验； (5)对各省级实验室检测人员的培训； (6)对各省级流感实验室的质量控制。 三、原始标本采集 1 医疗机构的医生、护士或当地疾病预防控制中心专业人员负责标本 采集并填写标本登记表，标本采集人员按照《禽流感职业暴露人员防护 指导原则》做好个人防护。 2 (1)采集标本的种类：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、血清 以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物。 (2)采集标本时间： 1)咽、鼻拭子或含漱液在发病的头 3 天采集； 2)急性期血清在发病后 7 天内采集，恢复期血清在发病后 2-4 周采 集； 3)尸检标本尸检时采集。 3 份，其中一份单独保存，以备复核。采集的标本若不能在 24 小时内送 达，则应尽快在-70℃以下保存。无-70℃条件的需在-20℃冰箱短时间 暂存，并尽快联系递送标本。 4 四、送流感中心的标本包装、运送与接收 1 (1)标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。 (2)将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一份标本。 (3)直接在塑料管上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、 姓名，同时也将标本有关信息填在禽流感人体标本送检登记表，连同塑 料管用另一塑料袋密封。 (4)将装标本的密封袋放入专用运输箱内(或疫苗冷藏包) ，放入冰排， 然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料。同一患者 2 份以 上的密封标本，可以放在同一个塑料袋内再次做密封。若将进行病毒分 离，可将密封好的装有标本的容器直接放入液氮运输罐内运输。所有容 器必须印有生物危险标识。 2 (1)航空或铁路运送。 (2)专人专车运送：主要用于近距离样品运送。 3 (1)各省级中心实验室应公布标本接收联系方式，并实行 24 小时标 本接收制； (2)国家实验室标本接收： 需送国家流感中心实验室检测的原始标本、病毒分离物、可疑阳性标本、 血清等，填写标本送检登记表，在低温保存条件下，于 24 小时内送至 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流感中心进行复核。国家流感 中心标本接收联系方式为：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所， 地址：北京市宣武区迎新街 100 号，联系人：郭元吉、王敏，联系电话： 010，010，传真：(010 五、标本检测