- 1、本文档共70页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
兽疫链球菌ATCC39920诱导表达系统的构建及应用-发酵工程专业论文
摘要透明质酸(Hyaluronic
摘要
透明质酸(Hyaluronic acid,HA)是一种线性、大分子量粘多糖,被广泛应用于 医药、化妆品等行业。兽疫链球菌(跏印,DcDcc淞叼“f subsp.zDD印f比聊fc“s)是工业 发酵生产HA的主要菌株,研究其生物学和代谢机理具有重要意义。基因调控表达是
揭示基因功能的有效手段,对兽疫链球菌尚缺乏基因诱导表达系统,严重阻碍基因功 能的研究。本研究以兽疫链球菌ATCC39920为研究对象,报道四种基于质粒调控的 诱导表达系统:蔗糖、乳糖、木糖和乳酸链球菌素(nisin)调控的诱导表达系统;并 以编码透明质酸合成酶的办删基因作为报告基因,以办口叫基因功能缺失导致荚膜缺 陷的△向口鲋作为宿主菌,观察诱导后荚膜生成情况验证系统的可行性;依据
△办别/pLH201的特性建立可控的两步法产HA的发酵模式。主要研究结果如下:
1、构建兽疫链球菌ATCC39920稳定复制的质粒 以pSET4s质粒为出发载体,成功构建大肠杆菌.兽疫链球菌穿梭质粒pLH200,
其拥有来源于pWV0l质粒的厂P础基因和用于筛选的壮观霉素抗性标记。包含pLH200
质粒的兽疫链球菌在无抗生素压力条件下培养24 h,pLH200质粒丢失率为O%,表明 此质粒用于基础研究的同时可避免使用抗生素引起的耐药性变异。
2、构建并分析四种诱导表达系统
以pLH200质粒为出发载体,插入sc旭.P刚调控元件,构建蔗糖诱导表达质粒,
在P。洲下游插入报告基因力嬲4,构建蔗糖调控向傩彳表达质粒pLH200::scrR.P卵叫::办傩彳‘ (pLH201)。分别用,口积-P托小砂腿-%朋和,?括肛,2括R.^蒯调控元件替换sc厂尺一B洲构建 乳糖、木糖、nisin调控的诱导表达质粒。四种诱导系统可行性分析表明:乳糖系统诱
导表达效率低;木糖和nisin系统不能诱导基因表达;蔗糖系统可严谨且高效诱导基 因表达,此诱导系统的成功构建为开展兽疫链球菌基因功能的研究夯实了基础。
3、建立可控的两步法产HA的发酵模式
将pLH201质粒电转化入幽州菌株中,构建幽州/pLH201菌株。此菌株在以葡 萄糖为糖源的培养基中不能合成荚膜,解除高粘度发酵液对溶氧和基质传递的限制; 其在蔗糖诱导下恢复合成荚膜的能力。据此本论文提出可控的两步发酵模式:在0.12 h添加初始浓度为30∥L的葡萄糖,意在获得高密度菌体。在12.24 h添加初始浓度 为20∥L的蔗糖,意在诱导合成荚膜,收获HA。经两步发酵后,△力剁/pLH20l的 HA产量为3.4∥L,而△办口鲥几乎检测不到HA。△办口叫/pLH201生物量为2.7∥L,期 望通过深入研究提高其菌体密度,利用此发酵模式必将提高HA产量。
关键词:兽疫链球菌;诱导表达系统:可控调节;两步法发酵;透明质酸
万方数据
ABSTRACTHyaluronic
ABSTRACT
Hyaluronic acid(HA)is lineaL high m01ecular weight polysaccharide and has been widely applied in medicine,cosmetics a11d otller industries.坨pfDcDcc姗zDDP矽f如聊纪”s is used for microbial production of hyaluronan on an industrial scaJe.Intensive research on S zDD9pf如,卯fc“s bi0109y and met£山01ism mechanism is of great significance.Ideal inducible promoter system is an e丘’ectiVe way to study gene function.However,the lack of a11
e虢ctiVe inducible promoter system for S zoo印f沈m记淞 has notably prevented t11e functional genomics a11alysis of this gram—positive bacterium.In this study,即fDcDcc“s
Pg甜f subsp.zoo印耐量历耙螂ATCC39920、vas used as the object of study.Here,we repoIrt the deVelopment of four plasmid-baSed inducible promoter systems,that is,sucrose,1actose, xylose and nisin con
您可能关注的文档
- 低阻尼Co2MnSi薄膜的生长、结构、磁性和酞菁酮中多极阻变、记忆效应的研究-凝聚态物理专业论文.pdf.docx
- 侵蚀坑作用下承插式埋地管道完整性评价方法-水工结构专业论文.pdf.docx
- 倒挂式圆管气吸玉米免耕精密播种机的研制-农业机械化工程专业论文.pdf.docx
- 倒角半径对碳纤维布约束型钢混凝土矩形短柱轴压性能的影响-结构工程专业论文.pdf.docx
- 偏氯乙烯共聚物无机纳米粒子复合材料及多孔炭的制备与表征-化学工程专业论文.pdf.docx
- 倾斜煤层巷道刚柔嵌合锚注支护技术研究-矿业工程专业论文.pdf.docx
- 偏振光谱成像系统标定技术研究-测试计量技术及仪器专业论文.pdf.docx
- 党报发行研究-新闻学专业论文.pdf.docx
- 倾斜基地深厚软土高速铁路桩-网复合地基性状研究-岩土工程专业论文.pdf.docx
- 全Stokes偏振成像技术的研究-光学工程专业论文.pdf.docx
最近下载
- 国家安全论文2000字范文(精选5篇).docx VIP
- 用电检查员技能培训课件—三相四线计量装置错接线分析及操作.pptx
- 第24课 人民解放战争(课件)-【中职专用】《中国历史》.pptx
- 讲好红色故事传承红色精神红色革命故事学习PPT.pptx VIP
- 心理健康指导师考试题库及答案.doc VIP
- 电子基础培训介绍.pptx VIP
- 离心式压缩机培训PPT.pptx VIP
- 犯罪心理学大学校园故意杀人罪的分析以云南大学学生马加爵杀人案为例.pdf
- SLT 631.1-2025 水利水电工程单元工程施工质量验收标准 第1部分:土石方工程.docx
- 高考历史判断题练习及答案.docx VIP
文档评论(0)