第六章木转基因2014.ppt

* * * * * * * * * * * * 180-250kb * * * * 除去 Ti 质粒上的其它非必需序列，最大限度地缩短载体的长度； NPTII基因编码新霉素磷酸转移酶，能赋予细胞抗卡那霉素的能力 * * * 随着植物病毒分子生物学及遗传学研究的不断深入，用病毒基因组作为载体转化植物细胞日益受到人们的重视，例如： 可以避免细胞培养和再生；繁殖率高，低水平的转录也可以鉴定出外源基因表达产物；启动子具有高的启动活性。对单子叶和双子叶都起作用。 * 子房中有较大单胚珠的植物如核果类植物，宜试用微注射法（属种质系统介导），因为将外源DNA直接注入卵细胞的可能性较大 * * 组织受体系统（如：受伤的细胞容易受到病毒或质粒的感染，并形成愈伤组织，可诱导分化出完整植株） ◆ 原生质体系统（便于体外细胞和遗传操作） ◆ 生殖细胞受体系统（1、单倍体培养诱导愈伤组织、转化；2、利用花粉和卵细胞的受精过程转化：类似转基因动物？） ◆ 叶绿体转化系统（能直接表达原核基因） * 在农杆菌液体培养基及共培养基中都加入AS * gus基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶 β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。 * GFP吸收的光谱，最大峰值为395nm（紫外），并有一个峰值为470nm的副峰（蓝光）；发射光谱最大峰值为509nm（绿光），并带有峰值为540nm的侧峰（Shouder). * 2008年10月8日，日本科学家下村修（伍兹霍尔海洋生物学研究所）、美国科学家马丁·查尔菲（哥伦比亚大学）和钱永健（加利福尼亚大学圣迭戈分校）因为发现和改造绿色荧光蛋白而获得了当年（2008）的诺贝尔化学奖。 * * Basic PCR process… Reminding the audience that PCR is designed to be an exponential process. * The Theory of the amplification kinetics is much different then what is actually observed. Picture explains the actual kinetics of the PCR process. Remember, PCR is an enzymatic process and is therefore affected by the same factors that effect ANY Enzymatic process. * Here we start to lay the groundwork for the idea that real-time PCR is used for quantitative work. * Practice with the animation so you understand the timing of this slide (if you haven’t used it before) - ask the audience to participate in this, it is a good way for you to determine the different comfort levels your audience has with the Ct concept. See next slide for relationship between dilution series and threshold cycle values. * The Flav R Savr tomato produced by Calgene (now part of Monsanto) was intended to allow tomatoes to vine ripen before they were picked and shipped to stores. A gene for an anti-sense RNA was cloned into the tomato. This RNA was to bind to the mRNA for the ripening gene, and prevent the ripening protein from being made. This was a good idea and the FDA approved the tomato for sale, but th