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血红蛋白醋酸纤薄膜电泳
1、掌握血红蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的操作。 2、了解醋酸纤维素薄膜电泳的原理和应用， 血红蛋白的组成和分类。 》Hb的组成： 》Hb的种类： HbA（α2 β2）：95-98% HbA2 （ α2 δ2 ）：2-3% HbF （ α2 γ2 ）：1%；（胎儿、新生儿：70-80%） 4条多肽链构成的珠蛋白（ α β γ δ） 血红素辅基 》电泳分离Hb 1、支持物：醋酸纤维薄膜（CAM） 2、缓冲液：pH8.6硼酸-氢氧化钠，TEB液 各种Hb的结构差异 迁移速率不同 分离 电荷，分子量不同 2、制备Hb溶液 反复洗涤 三次 皂素1滴 Hb溶液（样品） 1、取血: 本人指血 10～15μl 2000r/min 5min 丢弃上清液 血（10μl）﹢ 0.9% NaCl （3 ml） 3、电泳 1）醋酸纤维薄膜准备： (已完成） 2）点样：点样线上点样（毛面） 3）电泳：平衡5～10min； 电泳条件： 10V/cm（长），30-40 min 电泳结束：Hb区带分离后结束电泳。 点样线 ＋ － 8 cm 2 cm 4）染色：丽春红染色 8-10min 5）洗脱 ：背景发白，能辨清条带 6）观察分析结果 碳酸酐酶 HbA HbA2 点样线 ＋ － － ＋ α地中海贫血 HbH β地中海贫血 7）定量： 空白管 HbA HbA2 膜条 空白背景 HbA蛋白区带 HbA2蛋白区带 NaOH 3ml 6ml 3ml 10min后 醋酸 0.3ml 0.6ml 0.3ml 混匀后，520nm测定吸光度值（空白管调零） HbA% = AHbA*2/(AHbA*2 + AHbA2)* 100 HbA2% = AHbA2/(AHbA*2 + AHbA2)* 100 * *
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