第4章蛋白上质的通论.ppt

第4章 蛋白质的共价结构 教学目的与要求：了解蛋白质含量测定法、蛋白质分类方法、蛋白质一级结构与功能关系，掌握蛋白质结构层次特点、肽键特性及肽的物理化学性质、蛋白质一级结构结构测定步骤和方法、肽与蛋白质的人工合成，能解决一些关于肽与蛋白质结构测定与合成的问题。 教学重点：蛋白质一级结构、肽的物理化学性质、蛋白质一级结构结构测定步骤和方法 教学难点：蛋白质一级结构、肽的物理化学性质 1.蛋白质是生物体内必不可少的重要成分 蛋白质的组成 元素组成：碳50％、氢7％、氧23％、氮16％、硫0～3％、其他微量 蛋白质的平均含氮量：16％，凯式定氮法测量蛋白质含量的基础 蛋白质含量＝蛋白氮×6.25 （6.25即16％的倒数，为1g氮所代表的蛋白质量（克数））。 蛋白质的分类 按组成分： 按生物学功能分： 酶、调节蛋白、结构蛋白、转运蛋白等 按形状分： 纤维状蛋白质、球状蛋白质、膜蛋白 按肽链的多少（相对分子质量）分： 单体蛋白质、寡聚蛋白质（多聚蛋白质） 蛋白质的大小与分子量 蛋白质是分子量很大的生物分子。对任一种给定的蛋白质来说，它的所有分子在氨基酸的组成和顺序以及肽链的长度方面都应该是相同的，即所谓均一的蛋白质。 单体蛋白质：仅由一条多肽链构成 寡聚蛋白质：两条或多条多肽链构成，其中每条多肽链称为亚基，亚基之间通过非共价键相互缔合 不含辅基的蛋白质，用110除它的相对分子质量即可估计其氨基酸残基的数目。（蛋白质氨基酸的平均相对分子质量约为138，但在多数蛋白质中较小的氨基酸占优势，因此平均相对分子质量接近128，形成肽键时除去一分子水，所以氨基酸平均相对分子质量128-18＝110） 蛋白质的构象 蛋白质的构象：每一种天然蛋白质都有自己的特有的空间结构或称三维结构，这种三维结构通常称为构象。 构象形态间的改变不涉及共价键的破裂。 构型的改变必需通过共价键的破裂的改变。 蛋白质的结构层次 一级结构：基本结构，多肽链的氨基酸序列，由肽键连接而成的结构。 二级结构：多肽链主链构象 主要动力：氢键 主要形式：а－螺旋、β－折叠 三级结构：多肽链借助各种非共价键弯曲、折叠成具有特定走向的紧密球状构象。 四级结构： 寡聚蛋白质中各亚基之间在空间上的相互关系和结合方式。 一级结构决定高级结构，高级结构决定蛋白质功能。 二 肽（peptide） 一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基之间失水形成的酰胺键称为肽键，所形成的化合物称为肽。 肽键（peptide bond） 肽键的特点是氮原子上的孤对电子与羰基具有明显的共轭作用。 组成肽键的原子处于同一平面。 肽键 四肽的结构 （二）肽的重要理化性质 1. 熔点高。这说明它和氨基酸一样，是以偶极离子形式形成离子晶格而存在的。 2. 具有酸碱两性性质和等电点。肽的酸碱性质主要来自游离末端?-NH2和游离末端?-COOH以及侧链R上可解离的基团。每一种肽都有其相应的等电点。 3. 具有旋光性。这是由于肽中有不对称C原子存在。一般短肽的旋光度约等于组成该肽中各个氨基酸的旋光度的总和。但是较长的肽，其旋光度则不等于其组成氨基酸的旋光度的简单加和。 4.具双缩脲反应。这是肽和蛋自质所特有的，而为氨基酸所没有的一个颜色反应。一般含有两个或两个以上肽键的化合物与CuSO4碱性溶液都能发生双缩脲反应而生成紫红色或蓝紫色的复合物，利用此反应借助分光光度法可测定肽或蛋白质含量。 5.具紫外吸收。如果肽中存在有酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸，则在280nm处有最大吸收峰。利用这个特性可对肽类进行定量测定。 6.其他反应。由于肽中存在游离的?-NH2和游离?-COOH，所以能进行茚三酮反应、酰化反应、酯化反应等许多反应。 （三）天然存在的重要多肽 在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋白质的亚单位。 但是，生物体也有许多分子量比较小的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有特殊的生理功能，常称为活性肽（active peptide）。 如：脑啡肽；激素类多肽；抗生素类多肽；谷胱甘肽；蛇毒多肽等。 三 蛋白质的一级结构的测定 1. 定义—— 1969年，国际纯化学与应用化学委员会（IUPAC） 规定：蛋白质的一级结构指蛋白质多肽连中AA的排列顺序，包括二硫键的位置。其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生