医微第4浩次实验.ppt

《医学微生物学》实验四 实验内容 一、粪便标本中肠道致病菌的分离与鉴定 肠道致病菌与非致病菌从形态和染色难以区分，其鉴别主要依靠生化反应和抗原鉴定。故肠道致病菌引起的感染通常需作分离培养，并进行生化和血清学鉴定。此外，沙门菌所致肠热症（伤寒、副伤寒）尚可采用血清学试验（肥达试验）作为辅助诊断。 SS琼脂平板(Salmonella shigella agar) 组成成分： 属选择性鉴别培养基 ，含选择性抑菌剂和鉴别基质。  基础成分：蛋白胨、牛肉膏 抑制成分：胆盐、枸橼酸钠—抑制G+菌生长 0.1%煌绿水溶液—抑制大部分大肠杆菌生长  鉴别成分：乳糖、中性红水溶液 鉴别H2S：硫代硫酸钠、枸橼酸铁 双糖铁-半固体培养基组成成分 上层（固体）：蛋白胨、琼脂、乳糖、硫代硫 酸纳、硫酸亚铁、酚红 下层（半固体）：蛋白胨、琼脂、葡萄糖、酚 红 几种肠道杆菌在双糖铁-半固体培养基中的反应 血清学鉴定： 取双糖铁-半固体培养基细菌与已知沙门菌诊断血清或志贺菌诊断血清作玻片凝集试验，对分离的肠道杆菌作进一步鉴定。 二、大肠、伤寒、痢疾杆菌的培养和生化（示教） 1、在SS平板上的培养特性 乳糖 葡萄糖 H2S 动力 大肠埃希菌 ⊕ ⊕ - + 痢疾志贺菌 - + - - 伤寒沙门菌 - + +/- + 二、肥达试验(Widal test，p39) 原 理： 为试管凝集反应，是用已知伤寒沙门菌的菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原、甲型副伤寒沙门菌的鞭毛抗原（A）和肖氏沙门菌的鞭毛抗原（B）与待检血清作定量凝集试验，测定待检血清中有无相应抗体及抗体的效价，以辅助诊断肠热症。 试 剂： 伤寒杆菌 O12 H 甲型副伤寒杆菌 O12 H----- A 肖氏沙门菌 O12 H----- B 希氏沙门菌 O H----- 南方少见 引起肠热症的常见沙门菌的抗原组成 第１页 ：实验内容 一、粪便标本中肠道致病菌的分离培养与鉴定（示教） 二、大肠、伤寒、痢疾杆菌的培养及生化（示教） 三、肥达反应（自做） 第２页：肥达试验：原理、结果、分析、结论 * 南华大学病原学实验中心 南华大学微生物学与免疫学教研室 肠杆菌科概述 肠杆菌科（Enterobacteriaceae) 指一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌，常寄居在人和动物的肠道内，亦存在于土壤、水和腐物中。 肠杆菌科细菌种类繁多，有44个属，170多个种,引起人类感染的菌种不到20个种。 ①致病菌： 伤寒沙门菌、志贺菌、鼠疫耶尔森菌等； ②机会致病菌： 大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌等，在宿主免疫力降低或侵入肠外组织时可致病； ③由正常菌群转变而来的致病菌： 引起胃肠炎的某些血清型大肠埃希菌，通过基因转移获得毒位于质粒、噬菌体或毒力岛上的毒力因子基因后而成为致病菌 与医学相关的肠杆菌科细菌分三类： 生物学共性 1.形态结构 中等大小G－杆菌（不能鉴别） 多有菌毛/周鞭毛，少数有荚膜，无芽胞 2.培养 营养要求不高 3.生化反应 （重要鉴别依据） 乳糖发酵试验（初布鉴定）: 致病株(志贺菌/沙门菌等) - 大多非致病株 ⊕ 肠杆菌科细菌革兰染色 4.抗原结构（重要鉴别依据） ：主要有菌体O抗原和鞭毛H抗原和荚膜抗原。其他尚有菌毛抗原。 O抗原 H抗原 化学本质 LPS 蛋白质 耐热性 耐热 不耐热