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二、培养基的类型 在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。 （一）、根据培养基的物理状态来区分 主要用于增菌培养、鉴别性培养。 3、半固体培养基 增殖培养基 选择培养基 鉴别培养基 1、增殖培养基 2、选择培养基 鉴别用培养基 （三）培养基制备的基本方法和注意事项 9 培养基的保存 第二节、微生物检验的基本操作技术 主要内容 无菌技术 M的接种与分离技术 微生物的培养方法 微生物的生长现象与观察 一、无菌技术 （一）什么是无菌技术 　　指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 （二）无菌环境 无菌室 无菌柜 超净工作台 1、无菌室 （1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间 （2）无菌室的消毒和防污染 每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。 2、超净工作台 ??? 超净台的使用与保养: （1）风速保持在0.32-0.48米/秒; （2）使用前开启紫外灯照射30分钟以上; （3）让超净台预工作10－15分钟; （4）使用完毕后，用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净. （三）无菌器材 灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. 消毒器材：无菌室内的凳子、试管架、天平、工作台、手等 （四）无菌操作 1、目的： （1）是保证待检物品不被环境中微生物的污染； （2）是防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。 2、进入无菌室前的准备 （1）、定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）、用紫外线灭菌处理30~60分钟； （3）、检查无菌器材是否完备； （4）、洗手消毒； （5）、手部消毒后，再穿戴无菌工作服。 3、检验操作过程的无菌操作要求 （1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在正火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。 无菌操作 无菌操作 – 取菌技巧 1 无菌操作 – 取菌技巧 1 無菌操作 – 取菌技巧 1 无菌操作 – 取菌技巧 1 无菌操作 – 取菌技巧 2 无菌操作 – 取菌技巧 3 无菌操作 – 取菌技巧 4 无菌操作 – 取菌技巧 4 无菌操作 – 取菌技巧 4 无菌操作 – 接菌技巧 无菌操作 – 接菌技巧 無菌操作 – 錯誤示範 二、微生物的接种与分离技术 （一）、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 １、接种工具和方法 常用的接种方法有以下几种： １）划线接种 ２）三点接种 ３）穿刺接种 ４）浇混接种 ５）涂布接种 ６）液体接种 ７）注射接种 ８）活体接种 (二)、分离纯化 １、倾注平板法 ２、涂布平板法 ３、平板划线法 三、微生物的培养方法 一般培养法（需氧培养） 厌氧培养法 CO2培养法 （一）、一般培养法（需氧培养） 培养温度:25~37℃ （二）、厌氧培养方法 1、简易的厌氧培养法： （1）庖肉培养法 （2）铁丝圈厌氧培养法 （3）焦性没食子酸法 2、厌氧罐法 3、厌氧手套箱法 A、厌氧缸法 厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。 接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养。 B、厌氧罐法 使用： 装入待培养的对象，然后密闭罐盖，接着可采用抽真空→灌氮→抽真空→灌氮→抽真空→灌混合气(N2∶CO2∶H2=80∶10∶10，V/V)。 C、厌氧手套箱 （三）、二氧化碳培养法 1、烛缸法： 2、二氧化碳置換法 3、化学法：：每一升用重碳酸钠0.4克与浓盐酸0.35亳升加入 4、二氧化碳培养箱法 二氧化碳培养箱 二氧化碳培养法 四、微生物培养特性观察与记录 在固体培养基上，观察： 菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等； 在液体培养中： 表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。 半固体培养基穿刺接种： 观察运动、扩散情况。 思考题 1、什么是无菌技术？ 2、如何做好无菌室的消毒和防污染工作？ 3、如何做好超净台的使用与保养？ 4、无菌操作的目的是什么？ 5、进入无菌室前要做好哪些准备工作？ 6、验操作过程的无菌操作要求包括哪些内容？ 1. 調整 Pipetman