一株alv-j全基因序列分析及其rnai重是组腺病毒与dna疫苗的试验研究.docx

为验证课题组制备的砌蛆i重组腺病毒pAd-gp85-shRNA2对鸡 为验证课题组制备的砌蛆i重组腺病毒pAd-gp85-shRNA2对鸡 体内ALV-J感染的干扰效果，选择蛋清p27抗原阳性且血浆病毒分离 呈阳性的种鸡群作为实验对象，其中实验组(28只产蛋母鸡)接种 重组腺病毒100肛L(1．6×109PFU)／只、对照组(28只产蛋母鸡)注 射PBS 1009L。分别检测试验前后母鸡的体重、其后代雏鸡胎粪的 p27抗原阳性率；同时在试验后采集母鸡的蛋清进行p27抗原检测和 抗凝血进行病毒分离培养；接种后每周采集实验组和对照组各5只母 鸡的抗凝血和分泌物，对ALV-J和重组腺病毒分别进行定量检测。结 果发现，实验组和对照组母鸡的体重无显著差异；实验组母鸡蛋清 p27抗原阳转阴和血毒阳转阴的个体均为25％，后代雏鸡胎粪p27抗 原阳转阴的个体有19％；在接种后2w，母鸡体内的ALV-J拷贝数最 少、重组腺病毒对ALV-J的干扰效率也最高，可达68％；接种后4w， 母鸡体内仍可检测到重组腺病毒，与接种后4w时实验组ALV-J拷贝 数比对照组少的结果相一致，说明重组腺病毒在接种后4w仍能对母 鸡体内的ALV-J发挥干扰作用。 为验证课题组构建的DNA疫苗pVAXl一Ubl—gp85-p27-p10诱导 接种母鸡产生抗体及其后代雏鸡产生母源抗体的效果，选择蛋清p27 抗原检测阴性且ALV-J抗体也是阴性的产蛋母鸡作为实验对象。实验 组(25只产蛋母鸡)接种DNA疫苗、对照组(25只产蛋母鸡)注 射PBS，2w后以同样剂量重复注射一次。试验前后分别称量母鸡的 体重、检测免疫母鸡血清中的抗体及其后代雏鸡血清中ALV-J的母源 抗体。结果发现，实验组与对照组母鸡的体重无显著差异，有 Il 万方数据 28％的免疫母鸡(7只)和8％(2只)母鸡之后代小鸡的抗体出现阴 28％的免疫母鸡(7只)和8％(2只)母鸡之后代小鸡的抗体出现阴 转阳。 本课题研究的结果表明，从临床发病鸡成功分离到一株ALV-J 并完成了其全基因序列的测定与分析；通过动物试验证明，课题组研 发的重组腺病毒介导的RNAi能有效地干扰ALV-J在鸡体内的复制； 研发的DNA疫苗可刺激产蛋母鸡产生抗体并诱导其后代雏鸡母源抗 体的生成。 关键词：ALV-J全基因序列RNAi重组腺病毒DNA疫苗抗 体／母源抗体 Ill 万方数据 W1EIOLE W1EIOLE GENoME SEQUENCE ANALYSIS OF AN A I忑LJ ISoLATE AND EVrALUTIoN oN THE EFFECTS OF A RECoMBINANT ADENOⅥRUS MEDIATED RNAi AND A DNA VACCINE A(糊NST AI、LJ ABSTRACT Avian leukosis(AL)caused by avian leukosis virus(ALV)is one of common tumor diseases that could also cause immune suppression in poultry．Subgroup J ALV(ALV-J)is the most common and most harmful subgroup prevailing now in the industry．The infection of ALV in chickens may result in the reduction of egg production， immunosuppression，bleeding，tumor occurrence and growth retardation． However there is no yet effective vaccine or drug for the prevention and treatment for the disease．Eradication has been the major measure for the control of disease．A recombinant DNA vaccine and a RNAi recombinant adenovirus had been developed in the laboratory for the purpose to provide supplemental measures to the eradication program of AL．And the efficacy of these two products on chickens was evaluated in the study here．Also an iso