专题11dna重后组技术的基本工具.pptVIP

学习目标 1.简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用。 2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。 同步学案 1.基因工程又称为 技术或 技术。在体外将 基因 经“剪切”和“拼接”后，导入受体细胞内进行 ，使 在受体细胞内表达，产生出人类所需要 的或创建新的生物类型。 【答案】基因拼接、DNA重组、外源、无性繁殖、重组、基因产物 2.基因操作的工具 （1）基因的剪刀： ，主要存在于 中，特点：具有 ，功能：能够识别双链DNA分子的某种 核苷酸序列，并且使每一条链中 部位的两个核苷酸之间的 断开，因此具有 。大多数限制酶的识别序列由 个核苷酸组成。 （2）基因针线： ，其作用是将两段乃至数段DNA片段拼接起来的酶，主要是把两个 之间的缝隙“缝合”起来。 分类：根据酶的来源不同，可分为两类：一类是从 中分离得到的，称为 ；另一类是从 中分离出来的，称为 。 两种DNA连接酶的比较： 相同点：都缝合键。 区别：E·colDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的 之间连接起来，而不能将双链DNA片段 之间进行连接；而T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的 ，又可以“缝合”双链DNA片段的 。但连接平末端的之间的效率较 。 （3）基因的运输工具： ，具备条件:对受体细胞的 没有决定作用，能在受体细胞内 ，并稳定保存,具有 切点，便于 的连接，具有某些 ，便于筛选、检测、常见的运载体有 。 【答案】（1）限制性内切酶、原核生物、专一性、特定、特定、磷酸二脂键、专一性、6 （2）DNA连接酶、黏性末端、大肠杆菌、E·colDNA连接酶、T4噬菌体、T4DNA连接酶、磷酸二脂、黏性末端、平末端、黏性末端、平末端、低 （3）运载体、生存、复制、多个限制酶切点、目的基因、标记基因、动植物病毒、土壤农杆菌、大肠杆菌 3.基因工程中，限制性内切酶切质粒 ，个切口 ，个黏性末端，限制性内切酶切取目的基因个切口， 个黏性末端。 【答案】一、两、两、两 4.运载体的条件之一是含 种酶的 切点，而不是 含种酶的切点。 【答案】多种、一个、一种、多个 1.基因剪刀－限制性内切酶（微生物中） 特点：一种限制性内切酶只能识别特定的核苷酸序列，并能在特定的切点上切割DNA分子。 限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。 ①画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。 知识与技能 答： —G↓GATC C— —C CTAG↑ G— 用酶Ⅰ切割 —G —CCTAG— GATC— G— ②画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。 答： 2.基因的针线－DNA连接酶：作用是把两条DNA末端之间的缝隙“缝合”起来。 （1）分类 连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·colDNA连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4DNA连接酶。 （2）作用 这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口（nick），而不能连接单链DNA。 （3）DNA连接酶连接的是什么部位？ DNA连接酶是将一段DNA片段3′端的羟基与另一DNA片段5′端磷酸基团上的羟基连接起来形成酯键，而不是连接互补碱基之间的氢键。 3.基因的运输工具－运载体 （1）作用： 将外源基因导入受体细胞 （2）特点： 能在宿主细胞内复制并稳定地保存；具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；具有某些标记基因，便于进行筛选。 （3）作为载体必须具备以下条件： 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存，具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；具有某些标记基因，便于进行筛选，如对抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 （4）举例： 经常使用的有质粒、噬菌体和动植物病毒等。 注意：区分题目中的“工具”和“工具酶” 典例精析 例1下列关于质粒的叙述，正确的是（ ） A.质粒是广泛存在于细菌细胞中的