木薯内标准基因定性PCR方法分析.PDF

中国农学通报 2015,31(12): 193-199 Chinese Agricultural Science Bulletin 木薯内标准基因定性PCR方法分析 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 3 1,2 李美英 ，易小平 ，杨小亮 ，贺萍萍 ，谢 翔 ，刘恩平 ，郭安平 1 （中国热带农业科学院热带生物技术研究所/农业部热带作物生物技术与遗传资源利用重点实验室，海口571101 ； 2 农业部转基因植物及植物用微生物环境安全监督检验测试中心，海口571101 ； 3 中国热带农业科学院科技信息研究所，海口571101） 摘 要：内标准基因对于转基因植物及其产品的定性定量PCR 检测起着决定性的作用，木薯内标准基因 的系统研究是木薯转基因成分检测的基础。在木薯的DFCI(/tgi/plant. html)数据库中，选择了有可能作为木薯内标基因的一些EST 序列，包括亲环蛋白2(cyclophilin type 2 ， DB934316) 、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因B 亚单位(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase B subunit ， TC445)GAPDH、Actin 基因（TC2158 与TC3381 的拼接序列）、Alpha-tubulin (TC8072)基因，Polyubiquitin (TC9946) ，亚麻苦苷酶(linamarase ，TC 1540)6 个基因序列，设计了7 对定性PCR 的引物(CP2 、Actin 、 GAPDH、PUBQ2 、Tublinα1、Tublinα2 和LAM 1) ，并进行了种内一致性、稳定性和种间特异性测试分析。 结果表明，只有木薯的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因B 亚单位的GAPDH 定性PCR 引物扩增系统在木薯的 22 个不同品种中都能够得到一致性稳定性的扩增结果，在大戟科其他植物及其他非大戟科植物没有发 现非特异性扩增产物。另外6 个基因（CP2 、Actin 、PUBQ2 、Tublinα1、Tublinα2 和LAM 1 ）的定性PCR 引物 扩增系统在大戟科其他植物及非大戟科植物中都有非特异性的扩增产物。因此GAPDH 定性PCR 引物 扩增系统初步符合内标准基因的种内一致性，稳定性，种间特异性的特点，可应用于转基因木薯成分定 性PCR 检测。 关键词：木薯；内标准基因；定性PCR ；种内一致性；种间特异性 中图分类号：S19 文献标志码：A 论文编号：2014-2472 AnalysisofCassavaEndogenousReferenceGenesby UsingQualitativePolymeraseChainReaction(PCR) 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 3 1,2 LiMeiying ,YiXiaoping ,YangXiaoliang ,HePingping ,XieXiang ,LiuEnping,GuoAnping (InstituteofTropicalBioscienceandBiotechnology,ChineseAcademyofTropicalAgricultureSciences/KeyLaboratoryofBiology1 andGeneticResourcesofTropicalCrops,MinistryofAgriculture,Haikou571101; 2EnvironmentalSafetySupervisionandInspectionCenterforG