体积排阻色谱SEC使用维护指引.pdf

体积排阻色谱(SEC)使用维护指南 目录 I. 简介 II. 使用ACQUITY UPLC仪器进行SEC分析的注意事项 III. 开发稳定的UPLC SEC方法的重要性 a. 选择合适的ACQUITY UPLC BEH SEC蛋白分析专用柱 b. 方法开发 IV. SEC分离发生拖尾和/或分离度降低时的注意事项 a. 将ACQUITY UPLC BEH SEC蛋白分析专用柱连接到ACQUITY UPLC系统 b. UPLC SEC分离的系统扩散效应 c. 确定系统扩散体积 V. 延长ACQUITY UPLC BEH SEC蛋白分析专用柱的使用寿命 a. 流动相的制备与使用 b. 避免溶剂输送系统的微生物污染 c. 清洗ACQUITY UPLC系统 d. 最大程度减少BEH SEC蛋白分析专用柱被样品颗粒物污染 e. 避免BEH SEC蛋白分析专用柱被样品制剂成分污染 f. 色谱柱存放 VI. 总结和参考文献 VII. 订购信息 3 I. 简介 体积排阻色谱(SEC)是一种在生物治疗性蛋白质的开发和 2010年，沃特世(Waters®)公司首创性推出颗粒直径小于3 商业化过程中常用的分析技术。传统HPLC的SEC方法使用 µm的SEC色谱柱，该色谱柱能有效提高组分分离度并缩短 颗粒直径大于3 µm的色谱柱，颗粒内部的孔径分布适中， 分析时间。在经过合理设计的UPLC®系统中，这一色谱柱 可用于分离不同流体动力学体积(即斯托克斯半径)的蛋白 能够在8 min内分离并定量大于300,000 Da的单克隆抗体聚 质。理想情况下，蛋白质将根据其在溶液中的相对大小进 合物、150,000 Da的单克隆抗体和小于100,000 Da的单克 行分离。要顺利实现此分离，蛋白质与SEC颗粒之间不应 隆抗体片段(见图1)。本文档将详细介绍仪器、方法和色谱 存在次级相互作用(例如，疏水作用或离子作用)。 柱使用方面的注意事项，这些信息对于尽可能延长色谱柱 使用寿命以及获取稳定的UPLC SEC蛋白质分离方法十分 重要。 mAb单体： @ 150k Daltons HMW mAb二聚体 0.008 总峰面积=0.46% 0.007 LMW mAb片段1： 二聚体与单体之间的USP 0.006 分离度= 2.35 @ 100k Daltons 0.005 ) m n 0.004 0 8 2 ( V 0.003 LMW mAb片段2： U HMW mAb二聚体： @ 50k Daltons 0.002 @ 300k D