一氧化碳中毒小鼠脑ho-1的表达变化等及其与脑细胞凋亡的关系.docx

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：垒竖生． 签字日期： 兰丝璧年』月坐日 学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、 使用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机 构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授 权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 签字日期： 20 一氧化碳中毒小鼠脑HO．1的表达变化 一氧化碳中毒小鼠脑HO．1的表达变化 及其与脑细胞凋亡的关系 硕士生姓名： 赵林岩 指导教师： 王苏平教授 专业名称： 神经病学 摘 要 背景：一氧化碳中毒(co)是生活和生产中常见的中毒性疾病，严重 危害人类的健康和生命。急性一氧化碳中毒患者经过及时抢救治疗。大 多可以康复，但有部分患者在中毒症状缓解、意识恢复正常后，大约经 历2到60天表现正常或基本正常的间歇期后，会再次出现‘。系列脑病的 症状，称为一氧化碳中毒迟发性脑病(DEACMP)。Uemura等报道，CO 中毒死亡病人尸检发现皮层，基底节，海马，丘脑和小脑细胞凋亡与死广j共 存，凋亡细胞以海马CA2区更为明显Il J。脑细胞坏死丰要发生在CO中 毒所致的严重损伤之后，病变以炎性反应与组织损伤为特点IzJ，而CO 中毒所致DEACMP则是经历一段“正常”时期后才出现，推测DEACMP 症状的出现与CO中毒后神经组织细胞凋亡持续发生关系较大pl。目前对 血红素加氧酶(HO)的生物学特性已经有了较明确的认识，其在体内有三 种存在形式，即HO．1、HO．2、HO．3。其中HO一1为诱导型，各种理化 因素的刺激导致的脑损伤时都可增加HO．1的表达。在j下常的脑组织中， 主要表达HO．2，HO．1表达很少，甚至不表达。有文献报道【4，5】：动物实 验HO．1在缺氧缺血性脑病中与细胞凋亡相关联。 目的：研究一氧化碳中毒后不同时间点小鼠脑内血红素加氧酶-l的 表达变化；检测一氧化碳中毒后不同时间点小鼠脑内神经细胞凋亡及相 关基因表达的情况。探讨血红素氧化酶．1与脑细胞凋亡之间的变化关系。 进而推测一氧化碳中毒脑损伤的发病机制。为进一步寻求临床治疗的新 途径提供理论依据。 方法：雄性昆明小鼠，1 8～229，随机分为CO中毒组和空气对照 组。CO中毒组采用按体重(1 50ml／kg)每间隔6小时连续四次注射商纯 度(99．9％)的CO气体致小鼠中毒改良模型进行染毒。空气对照组采用按 体重(1 50ml／kg)每间隔6小时连续四次注射空气。应用苏木素一伊红染 色观察海马区脑组织病理形态损伤；采用SABC免疫组化法研究HO-l、 Bel．2、Bax在蛋白水平的表达，于400倍光镜下计数5个视野平均阳性 Bel．2、Bax在蛋白水平的表达，于400倍光镜下计数5个视野平均阳性 细胞数：应用Western blot法观察HO．1蛋白水平的表达。应用流式细胞 仪法检测凋亡细胞。数据以均数±标准差表示，统计学处理采用SPSSl 3．0 软件进行t检验。 结果：l、光镜下脑组织海马区的病理改变：(1)空气对照组在各时 间点脑组织切片染色未见明显改变。(2)CO中毒组1 d可见神经细胞肿 胀，细胞数目略减少，细胞淡染；3d除上述变化外，可见部分坏死细胞， 细糖核旅缩，细胞间隙扩大。5d时上述现象进一步明显，海马区可见大 量坏死细胞，细胞水肿加重。21d时细胞水肿减轻，但仍可见部分坏死细胞。 2，免疫组化法HO．1蛋白表达情况：空气对照组阳性细胞较少，染 色较浅； CO中毒组，海马阳性细胞数较多，染色较深，且除Oh外，不 同时间点阳性细胞数与对照组相比有统计学意义。HO．1在l d表达增加 (52．75+6．5)(pO．01)，3d达高峰(98．0+8，64)(pO．01)，5d时下降(73．0士8．6) (pO．01)，21 d时(3 5．54-2．08)仍高于对照组。 3、Western blot法HO．1蛋白表达情况：空气对照组表达较少，CO 中毒组在1 d表达增加(1．1 44-0．43)(p0．01)，3d达高峰(2．9 14-1，07) (p