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对流免疫电泳 免疫学 基本概念 可溶性抗原与相应的抗体在溶液或凝胶中接触可形成肉眼可见的抗原与抗体复合物沉淀,即免疫沉淀反应.可溶性抗原亦称沉淀原,抗体亦称为沉淀素. 沉淀物形成的主要原是因为抗原与抗体分子表面的疏水基团相互接近而有效的排出它们之间的水分. 免疫复合物的形成通常经过两步 1:抗原与抗体的特异性结合 2:形成肉眼可见的免疫复合物晶格. 分类 单向扩散 即将一定量的抗体混合于琼脂中，待琼脂凝固后打孔并加入抗原，孔中的抗原向四周扩散，在抗原与抗体的比例合适处呈现白色的沉淀环。沉淀环的大小与抗原的浓度成正比，故该试验是定量试验。 双向扩散 即将抗原和抗体分别加入琼脂对应的孔中，二者会向四周扩散，在二者比例合适处形成白色沉淀线。 火箭免疫电泳 单向扩散+电泳：将单向扩散与电泳技术相结合的一种方法。 沉淀峰的高度与抗原的浓度成正比。 对流免疫电泳 实验目的 熟悉对流免疫电泳的原理 掌握对流免疫电泳的操作方法 了解对流免疫电泳的应用 实验原理 利用琼脂双向扩散与电泳技术结合的方法,根据抗原与抗体所受电场力与电渗力合力的大小,使它们发生对向移动,在它们浓度与比例合适处形成肉眼可见的沉淀物. 电渗：指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动称为电渗。液体移动的方向取决于固体带的是正电荷或负电荷，如果电渗的方向于样品的移动方向相同，那么样品的迁移率加快，反之，减慢，甚至倒退。实际上在电泳的过程中受到电泳力和电渗力的双重作用。 实验材料 1℅琼脂 打孔器 微量加样器 玻片 抗原 抗体 实验步骤 结果分析 注意事项 一 抗原、抗体的电极方向不能放反 二 电泳时电流不宜过大,以免蛋白质变性 三 抗原、抗体相对浓度要适当 四 电泳的时间与孔距等有关 思考题 一 简述对流免疫电泳试验的原理? 二 如果本试验中没有出现沉淀线考虑有何因素? 三 说明凝集反应与沉淀反应的区别。 Presented By Harry Mills / PRESENTATIONPRO Presented By Harry Mills / PRESENTATIONPRO Presented By Harry Mills / PRESENTATIONPRO * * 沉 淀 反 应 环状沉淀反应 絮状反应 琼脂扩散试验 双向扩散 单向扩散 ＋ 电 泳 技 术 火箭免疫电泳 对流免疫电泳 电场力 电场力 电场力 电场力 抗原－ 抗体＋ 电场力 ＞ 电渗力 电场力 ﹤ 电渗力 槽式电泳仪 电炉等 制板 打孔 加样 电泳 3－4ml琼脂 孔间距3mm 抗原 抗体 *