里氏木霉内切纤维素酶活性架构及关键亚位点功能研究-微生物学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 山东大学硕士学位论文目录 山东大学硕士学位论文 目录 中文摘要 ．I ABSTRACT 一IⅡ 缩略词表 ⅥI 第一章绪论 ．．1 1．1木质纤维素原材料的特征 1 1．1．1半纤维素及木素等成分 ．．2 1．1．2纤维素 ．．4 1．2降解纤维素的微生物 7 1．2．1细菌域微生物 ．．7 1．2．2真菌域微生物 ．．9 1．2．3古菌域微生物 10 1．3纤维素高效降解菌株——丝状真菌 ．．10 1．3．1丝状真菌的高效分泌特性 11 1．3．2丝状真菌分泌的游离胞外酶系 12 1．4碳水化合物活性酶类数据库(CAzv) 14 1．4．1 CAZv数据库的概述 ．14 1．4．2糖苷水解酶家族 15 1．4．3主要糖苷水解酶家族 15 1．5立项依据 ．．19 第二章 内切纤维素酶和底物糖环的结构生物信息学分析 ．．2 l 2．1材料与方法 一21 2．1．1生物信息学网站及数据库 2l 2．1．2生物信息学软件 2l 2．1．3数据的获取与处理 21 2．1．4序列与结构比对 22 2．1．5糖苷水解酶家族活性架构区域氨基酸频率分析 22 2．1．6糖苷水解酶家族活性架构序列谱的制作 23 万方数据 山东大学硕士学位论文2 山东大学硕士学位论文 2．2结构与分析 一23 2．2．1 底物扭曲的多样性与内切纤维素酶的分型 23 2．2．2主要糖苷水解酶家族信息分析 26 2．2．3糖苷水解酶活性架构区域 27 2．2．4糖苷水解酶家族活性架构部位氨基酸使用频率 28 2．2．5糖苷水解酶家族的活性架构序列谱 30 2．2．6糖苷水解酶家族关键亚位点氨基酸分析 3 1 2-3小结与讨论 ．．32 第三章异源表达系统及重组酶性质分析 ．．35 3．1材料与方法 ．．35 3．1．1菌株及质粒 35 3．1．2试剂及培养基 35 3．1-3主要仪器与试剂 36 3．1_4 以大肠杆菌为宿主的原核表达系统 37 3．1．5 以毕赤酵母为宿主的真核表达体系 40 3．1．6蛋白浓度的测定 42 3．1．7酶活性测定 42 3．1．8酶分子最适反应条件的测定 42 3．2结果与分析 ．．43 3．2．1 基因克隆与重组质粒的构建 ．．．． 43 3．2．2外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 43 3．2．3 外源基因在毕赤酵母GSll5中的诱导表达 44 3．2．4两种表达体系的比较 45 3．3小结与讨论 ．．45 第四章矾e15A酶分子活性架构关键亚位点功能研究 ．．47 4．1材料与方法 一47 4．1．1菌株与质粒 47 4．1．2主要仪器及试剂 47 4．1．3定点突变引物 ．．．． 48 万方数据 山东大学硕士学位论文4 山东大学硕士学位论文 4．1．4定点突变 48 4．1．5突变体蛋白在大肠杆菌Orig锄：li(DE3)菌株中的表达和纯化 49 4．1．6突变体蛋白的酶活性质测定 49 4．1．7 荧光辅助糖电泳(FACE)技术展示蛋白降解产物谱 ．．49 4．2结果与分析 ．．5l 4．2．1 Mel5A关键位点一2亚位点的选择 51 4．2．2基因曙力关键氨基酸的定点突变 51 4．2_3 突变体蛋白的纯化 52 4．2．4突变体蛋白的酶活性质测定 53 4．2-5突变体蛋白的产物谱变化 56 4_3小结与讨论 ．．57 第五章 巩e17B酶分子活性架构关键亚位点功能研究 ．．59 5．1材料与方法 ．．59 5．1．1菌株与质粒 59 5．1．2主要仪器及试剂 59 5．1．3基因克隆与重组质粒的构建 59 5．1．4定点突变引物 60 5．1．5定点突变 60 5．1．6重组质粒的转化及异源蛋白的诱导表达 60 5．1．7突变体蛋白的性质测定 61 5．1．8突变体蛋白降解RAC分析 ．61 5．2结果与分析 一6l 5．2．1 Mel7B(EGI)的基因克隆与异源表达 61 5．2．2胍e17B关键位点一2亚位点的选择 62 5．2-3基因叫，关键氨基酸的定点突变 63 5-2．4突变体蛋白的纯化 64 5．2．5突变体蛋白的酶活性质测定 64 5．2．6突变体蛋白的产物谱变化 67 5_3小结与讨论 一68 万方数据 山东大学硕士学位论文与 山东大学硕士学位论文 与 展 望 ～ ～ 一 ～ ～ ～ ～ 一 一 ～ 一 ～ 一 ～ || ～ || ～ || || ～ ～ ～ || ～ 石 文考 || ～ 一 ～ 一 || || ～ || ～ 一 ～ ～ ～ 一 ～ |； ～ 一 ～ ～ ～ ～ ～ ～ 一 ～ ～ ■ ～ ～ || ～ || ～ ～ 一 ～ 一 ～ ～ ～ ～ ～ 一 ～ 一 i| 撂 全参致攻 读 黼嫦龇靴结献扎位 一期 |；问 ||发 ～表 ～的 ～学 ～术