玉米大斑到三病菌hog-mapk级联途径中sthog1基因的功能研究.docx

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。据我所知，除了文中特另IJ加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经 发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或其他教育机构的学 位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文 中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：傀豫 签字日期． 蒯年／月／日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。 本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复带lJ-T段保存、汇编学位论文。 学位景裳#餮蓑脆胖掀书‰名：瓤瓦靴敝储戳：俸稻 刷醛轹牟代阢 签字日期：刀∥年∥月么日 签字日期：加形年多月‘日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编： 万方数据 fIll[fill fIll[fill I[H lll li Illl[IJ llf 摘要 Y31 00902 本课题组前期克隆了玉米大斑病菌HOG．MAPK级联途径中的MAPK基因，并 命名为StHOGl。本研究利用农杆菌介导的转化技术，获得：2株StHOGI基因的敲除 突变体；进一步研究了该基因对病菌生长发育、致病力、高渗胁迫及杀真菌制剂敏感 性的影响。研究结果不仅有助于阐明HOG．MAPK级联途径的功能，也为研发针对 MAPK信号途径的新型杀菌剂提供理论依据。主要研究结果如下： (1)以pBS．PUC及pPZPl00载体为骨架，构建了玉米大斑病菌StHOGl基因敲除 载体。利用农杆菌介导的转化技术，筛选得到2株草胺磷抗性转化子；通过BAR基 因引物PCR、StHOGl特异引物PCR、RT-PCR和Southern blotting证实这2株转化子 为StHOGl基因敲除突变体，分别命名为AStHOGl．1和AStHOGl．2。 (2)在PDA培养基中，玉米大斑病菌StHOGl基因敲除突变体菌落生长速率显著高 于野生型菌株，突变体菌丝颜色较浅，气生菌丝疏松，不产生分生孢子，表明StHOGl 基因负调控病菌的菌丝生长，正调控分生孢子发育。 (3)透射电镜观察发现，在正常培养条件下，野生型菌株基生菌丝表面附着大量絮 状物质而StHOGl基因敲除突变体基生菌丝表面光滑；在高渗胁迫培养基中，野生型 菌株基生菌丝细胞壁表面的絮状物质变得致密，2株突变体菌丝细胞壁表面的致密絮 状物很少，说明StHOGl基因与絮状物质的产生密切相关；用细胞壁合成干扰物质 Congo red、CFW、SDS处理后，突变体菌落生长抑制率明显低于野生型菌株，以上 结果说明StHOGl基因参与调控病菌细胞壁的发育。 (4)在0．4 M NaCI、0．4 M KCl、0．6 M山梨醇的高渗胁迫条件下，突变体对高渗胁 迫更敏感，菌落生长受抑制程度高于野生型，尤其对山梨醇的反应；进一步研究发现， 正常培养条件下两株突变体与野生型菌株的甘油含量没有明显差异，而在高渗胁迫条 件下野生型菌丝细胞的甘油含量约为突变体的1．5倍，这表明高渗胁迫下StHOGl基 因缺失减少了病菌菌丝中甘油的积累量，这可能是导致突变体对高渗胁迫更敏感的原 因。 (5)在含有杀菌剂咯菌腈、异菌脲的PDA培养基中，StHOGl基因敲除突变体菌落 生长受抑制程度明显低于野生型，表明删Gj基因负调控病菌对杀菌剂(咯菌腈、 异菌脲)的耐受性。 关键词：玉米大斑病菌；MAPK；StHOGl；基因敲除；基因功能 万方数据 Functional Functional Analysis of StHOGl Gene Encoding a MAP Kinase in HOG-MAPK Cascade Pathway of Setosphaeria turcica Author：TANG Cong Supervisors：HAN Jian—min GU Shou-qin DONG Jin-gao Major：Botany Abstract In our previous study,a MAPK gene named姗G1．which belongs to HOG．Ⅳ队PK signal transduction pathway of Setosphaeria turcica．was cloned．In this study,two stHoGl gene knockout mutants were obtained employing Agrobact