水稻rack1蛋白的切定位研究.pptVIP

水稻RACK1蛋白的定位研究 姓名：甄萍萍 导师：梁建生 专业: 植物学 综述 水稻是人类主要粮食作物之一，随着国民经济的发展和社会环境的改变，水稻生产受到越来越多的不利因素的限制，如病虫害、环境污染、水资源的短缺等，严重制约了水稻的高产和稳产，所以必须进行品种改良，其中一个方向就是对水稻抗旱品种的开发研究。干旱胁迫可引起植物细胞一系列形态和生理生化响应，植物经过长期的进化，形成了一系列主动响应干旱胁迫的机制。植物细胞通过感受外界刺激将胞外信号转化为胞内信号，进而调控相关基因表达，响应外界刺激。G蛋白偶联信号转导系统是重要的细胞信号转导途径，参与许多重要生命活动的调节响应，该系统中的G-蛋白就参与了植物响应干旱胁迫和信号转导及基因表达等调节作用。 WD40重复蛋白是一个具有高度保守基序但具有多种功能的大家族。异三聚体G蛋白β亚基属于WD40重复蛋白。Dell等通过酵母双杂交的方法发现了G蛋白βγ亚基可能的新效应分子，即活性C激酶1受体(Receptor for Activated C Kinase 1, RACK1)、动力蛋白中间链和一个未知功能的蛋白质(GeneBank登陆号为AAH20044)。这些蛋白质都具有WD40重复。 RACK1在广大物种中是高度保守的；研究发现，哺乳动物和植物中都存在RACK1同源物的踪迹，如猪、非洲爪蟾、鼠、大豆、山毛榉等。Chen JG等(2006)在分析鱼、昆虫和真菌的EST数据库和基因组时均发现了RACK1同源物。植物中第一个被发现的RACK1同源基因是烟草BY-2悬浮细胞中的一个生长素诱导基因arcA，之后在拟南芥、水稻、烟草、番茄、苜蓿和藻类中都发现了RACK1同源基因的存在。烟草和番茄中至少有两种RACK1同源物。 报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列融合形成嵌合基因，或与其他目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选转化体。 目前研究中曾用过的报告基因有:β-半乳糖苷酶 (β-Lac ) ,氯霉素乙酸转移酶(CAT)、新霉素乙酞转移酶(NPII)、荧光素酶(Lux)、和β-葡萄糖苷酶(β-GUS )等。但这些传统的报告基因有着许多的不足。GUS基因所用的检测底物成本较高，且会对细胞造成毒害，染色中的一些物理，化学步骤会损伤细胞的超微结构，其中间反应的扩增也会影响葡萄糖苷酶本身的在细胞内的准确定位;以荧光素酶基因作报告基因检测时需加入荧光素，荧光素可在机体内随质流移动，使其往往难以准确地指示荧光素酶基因的特异性表达部位;而β-半乳糖苷酶基因作报告基因需要外源底物X-gal和诱导物IPTG的参与，故成本高，且操作繁琐。新霉素、氯霉素基因作报告基因的编码产物对转基因个体的幼胚存在一定的毒副作用。  绿色荧光蛋白(GFP)是存在于发光水母体内，它是一种吸收蓝光或紫外光后发出绿色荧光的天然蛋白质。这种蛋白质在表达时可自身催化形成荧光基团，而且不需要添加任何底物或辅助因子，这样它就可以免除在检测时底物对细胞造成的一些物理、化学损伤，降低了添加的辅因子在对转基因个体进行观察时造成的假象，同时又降低了检测成本，简化了繁琐操作。 因此，在转基因研究中，利用GFP作报告基因则可以大大提高转基因动、植物的成功率，减少转基因个体筛选、鉴定方面的工作量。 植物基因工程的基本路线 (1) 目的基因的分离 (2) 将目的基因克隆到适当的载体DNA中形成重组DNA，并且连接了一个控制目的基因转录表达的启动子和一个控制目的基因转录终止的终止子，还连接一个编码特殊蛋白质（如荧光蛋白）的标记基因。 (3) 利用细菌繁殖扩增重组DNA。 (4) 利用基因枪、农杆菌等方法将连接了启动子和终止子的目的基因导入到目标植物的细胞中。 (5) 筛选含有外源基因的转化细胞，并诱导产生转基因植株。 (6) 大规模种植转基因植物。 选题意义 对拟南芥AtRACK1的研究表明，AtRACK1参与了植物对干旱胁迫信号的响应过程，并且与植物的忍耐干旱密切相关。与AtRACK1蛋白的氨基酸序列为模板对水稻基因组序列进行比对，我们找到两个与编码ATRACK1基因高度同源的基因（NP-916988和XP-475866）。在蛋白质水平两者与ATRACK1蛋白的同一性和相似性分别