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重 庆 大 学
学 生 实 验 报 告
实验课程名称 水质仪器分析实验
开课实验室 市政与环境工程实验研究中心
学 院 城 环 年级 20010 专业班 给排水3班
学 生 姓 名 童思源 学 号
开 课 时 间 2013 至 2014 学年第 一 学期
总 成 绩
教师签名
城市建设与环境工程学院制
开课学院、实验室:市政与环境工程实验研究中心 实验时间 :2013年 11 月 27 日
课程
名称
水质仪器分析实验
实验项目
名 称
荧光分光光度计测定
实验
实验项目类型
验证
演示
综合
设计
其他
指导
教师
古励
成 绩
一、实验目的
了解荧光分光光度计三维扫描和波长扫描的使用。
二、实验原理
荧光,是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光照射,吸收光能后进入激发态,并立即会激发并发射出出射光,而且一旦停止入射光,发光现象也随之消失。
物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出,从而产生荧光. 不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征,这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱,因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
荧光分光光度计由光源氙弧灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发光单色器变成单色光后,此光即为荧光物质的激发光,被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光,经过单色器变成单色荧光后照射于测样品用的光电倍增管上,由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪,激发光单色器和荧光单色器的光栅均由电动机带动的凸轮所控制,当测绘荧光发射光谱时,将激发光单色器的光栅,固定在最适当的激发光波长处,而让荧光单色器凸轮转动,将各波长的荧光强度讯号输出至记录仪上,所记录的光谱即发射光谱,简称荧光光谱。 荧光分光光度计,当测绘荧光激发光谱时,将荧光单色器的光栅固定在最适当的荧光波长处,只让激发光单色口的凸轮转动,将各波长的激发光的强度讯号输出至记录仪,所记录的光谱即激发光谱。 当用荧光分光光度计进行样品溶液的定量分析时,将激发光单色器固定在所选择的激发光波长处,将荧光单色器调节至所选择的荧光波长处,由记录仪得出的信号是样品溶液的荧光强度。
荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各种角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定,不但可以做一般的定量分析,而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化,从而阐明分子结构与功能之间的关系。可用于液体、固体样品(如凝胶条)的光谱扫描。
荧光分光光度计基本结构
1.光源: 为氙弧灯,能发射出强度较大的连续光谱。 2.激发单色器: 置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器,筛选出特定的激发光谱。 3.发射单色器: 置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器,常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。 4.样品室: 由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时,光源与检测器成直角安排;测量固体时,光源与检测器成锐角安排。 5.检测器: 一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号
三、使用仪器、材料
F7000荧光分光光度计、电脑、打印机等
四、实验步骤
(一)仪器操作步骤
1、开机顺序:
(1) 接通电脑及打印机电源,进入Windows操作系统。
(2) 接通光度计左侧电源开关(POWER)约5秒钟后主机右上方绿色氙灯指示灯点亮,表示氙灯已经启辉工作。
(3) 双击电脑屏幕上FL Solutions 荧光分析快捷框,进入仪器操作界面。
2、关机顺序:
(1) 使用仪器操作软件退出操作系统并关闭氙灯。
(2) 保持主机通电10分钟以上最后关闭主机电源开关。(目的是让灯室充分散热)
3、波长扫描的简易操作:
点击快捷栏“Method” 后,立即显示了分析方法(Analysis Method)的五个模块界面,分别为“常规”(General),“仪器条件”(Instrument),“监视界面”(Monitor),“处理”(Processing),“报告”(Report)。下面详细介绍每个界面:
(1) General(常规)
*Measurement(测量方式)--------选择Wavelength (波长扫描
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