联合脂肪间充质干细胞移植对糖尿病视网膜病变大鼠血-视网膜屏障的影响-眼科学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 北京协和医学院博士研究生学位论文2 北京协和医学院博士研究生学位论文 2．3．5人脐静脉内皮细胞的鉴定结果 29 2．4讨论 30 2．4．1移植细胞种类的选择 30 2．4．2细胞的分离和鉴定 32 2．5小结 33 第三部分糖尿病视网膜病变大鼠模型的细胞治疗效果及机制探讨 34 3．1材料 34 3．1．1主要试剂 34 3．1．2主要耗材 35 3．1．3主要仪器 36 3．2方法 ．37 3．2．1糖尿病视网膜病变大鼠的治疗分组 37 3．2．2尾静脉注射细胞 37 3．2．3大鼠血糖检测 39 3．2．4大鼠血一视网膜屏障渗透性实验 ．．39 3．2．5大鼠眼球HE染色、免疫组化、免疫荧光及共聚焦 ．40 3．2．6利用qPCR检测视网膜VEGF、Ang一2、ICAM一1 ．．42 3．2．7利用Western blot检测视网膜VEGF、Ang一2、ICAM一1 45 3．3结果 48 3．3．1干预后大鼠血糖及体重变化情况 ．．48 3．3．2干预后大鼠血．视网膜屏障渗透性实验结果 ．49 3．3．3干预后大鼠眼球HE染色、免疫组化及共聚焦结果 5l 3．3．4干预后大鼠视网膜VEGF、Ang．2、ICAM一1表达情况 ．57 3．3．5干预后大鼠其它脏器HE染色及免疫组化染色结果 ．。62 3．4讨论 ．65 3．4．1细胞的干预方式及时机的选择 ．65 3．4．2大鼠血糖及体重变化 ．66 3．4．3大鼠血．视网膜屏障、眼球病理及相关因子表达 ．67 3．4．4大鼠其它脏器病理 ．70 3．4．5实验的不足之处 ．．72 3．5小结 ．73 参考文献(一) 74 第四部分综述干细胞在糖尿病视网膜病变中的应用展望 ．．82 4．1引言 ．。82 4．2糖尿病视网膜病变的发展 83 万方数据 北京协和医学院博士研究生学位论文4 北京协和医学院博士研究生学位论文 4．2．1缺血 83 4．2．2神经变性 84 4．3糖尿病视网膜病变的治疗 ．．84 4．4间充质干细胞 ．．84 4．4．1间充质干细胞应用于糖尿病的可行性 ．．85 4．5内皮前体细胞 ．86 4．5．1内皮前体细胞的相关争议 ．．86 4．5．2内皮前体细胞的临床应用 ．．87 4．5．3增强原有内皮前体细胞的功能 ．．87 4．5．4内皮前体细胞用作细胞替代治疗 ．．87 4．6脂肪基质细胞 ．88 4．7多能干细胞 ．88 4．8结论 ．89 参考文献(二) ．．90 缩略词表 99 己发表和待发表文章 ．100 个人情况 ．101 致谢 ．102 独创性声明 ．103 万方数据 北京协和医学院博士研究生学位论文中文摘要 北京协和医学院博士研究生学位论文 中文摘要 目的：探讨脂肪间充质干细胞(adipose．derived mesenchymal stem cell，AMSC)联合 类内皮细胞(endothelial．1ike cell，ELC)或人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell，HUVEC)移植对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy， DR)大鼠的血．视网膜屏障(blood—retinal barrier，BRB)的影响及作用机制；评价 不同剂量的AMSC移植治疗DR大鼠的效果。 方法：以链脲佐菌素腹腔注射法建立Wistar大鼠糖尿病动物模型。于注射后7个月 (30周)时，随机抽选大鼠行视网膜血管网消化铺片以明确DR血管性损伤的发生。 原代分离、培养AMSCs和HUVECs，流式细胞仪进行鉴定。将AMSCs置于内皮 细胞培养基中诱导分化得到ELCs。DR大鼠随机分组：未治疗组、诱导组(AMSCs +ELCs)、联合组(AMSCs+HUVECs)、高剂量组(AMSCs)及低剂量组(AMSCs)， 经尾静脉注射行细胞干预。于干预后2、4周，Evans blue渗漏实验评估大鼠的BRB 功能；HE染色评估大鼠视网膜水肿度； qPCR及Western—blot检测大鼠视网膜细 胞间黏附分子．1(intercellular cell adhesion molecule．1，ICAM．1)、血管内皮生长因 子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、促血管生成素．2(angiopoietin一2， Ang．2)的表达；免疫组织化学及共聚焦荧光染色观察移植细胞向视网膜的归巢； 心、肝、脾、胰、肾的HE及免疫组织化学染色评估细胞移植的安全性。 结果： 1)DR模型：7个月时，糖尿病大鼠的视网膜血管网消化铺片可见闭锁的无细胞性 毛细血管，DR大鼠模型建成。 2)细胞培养：原代培养的AMSCs及诱导