离子交换层析..ppt

第九章 离子交换层析及凝胶过滤介质 What happens in ion exchange? What happens in ion exchange? What happens in ion exchange? What happens in ion exchange? What happens in ion exchange? 二、离子交换剂的部分性质 ㈠ 粒度 基质颗粒大小直接关系到分离效果，颗粒越小，层 析柱的理论塔板数就越大，分离效果越好，但同时 交换容量变小，层析时背景压力增大，限制了流速 的提高，因此细颗粒的介质常适用于分析型分离； 相反，基质颗粒越大，柱效率会下降，但离子交换 剂的交换容量提高，背景压力减小，因此大颗粒介 质适合于实验室小规模分离及大规模工业化分离。 ㈡ 交联度和网孔结构 交联度的大小影响着离子交换剂的很多特性，包括机械强度、膨胀度、网孔大小、交换容量等。 一般交联度越高，网孔的孔径越小；交联度越低，网孔孔径越大。仅琼脂糖交换剂是例外. ㈡ 交联度和网孔结构 分离介质的孔有3种结构。第一种通过交联使大分子链间形成孔，这叫凝胶孔。 第二种在有溶剂存在条件下进行聚合，称为大孔树脂。 第三种为琼脂糖介质的孔，孔径大小仅与琼脂糖浓度有关，交联对孔结构影响不大。 ㈢ 电荷密度 电荷密度是指基质颗粒上单位表面积的取代基（功能集团）的数量，它决定着离子交换剂的交换容量、膨胀度等性质。对小分子进行离子交换时，交换剂上功能基团密度越大，工作能力越强，高电荷密度的离子交换剂具有优势。 ㈣ 膨胀度 又称吸水值，是指当干态的离子交换剂在 水溶液中吸水后造成体积膨胀的程度，通 常用每克干胶吸水膨胀后的体积（毫升） 来表示。 ㈤ 交换容量 交换容量是指离子交换剂能够结合溶液中可交换离子的能力，通常分为总交换容量和有效交换容量。 总交换容量用每克干介质或每毫升湿胶包含的带电功能基团的数量来表示.可以通过酸碱滴定的方法来测定，也可使得离子交换剂和某种小的离子之间发生完全交换，然后通过测定该离子的含量算出总交换容量，总交换容量并不反映交换剂对可交换分子的结合情况. 有效交换容量指每克干介质或每毫升湿胶在一定的实验条件下吸附某种分子的实际容量。由于有效容量是一个变值，在说明其数值时应当同时指出实验条件. 一般情况下，同一种交换剂对于分子量小的蛋白质有效交换容量较大，而对于分子量大的蛋白质有效容量较小；对于同一种蛋白质，离子交换剂的交联度越小有效容量越大，而交联度越大有效容量越小。 1.在选择梯度的形状时，如果是对目的物首次进行离子交换分离，强烈建议采用线性梯度. 2.凸形梯度有利于改善梯度末尾部分的分辨率，对于一份混合样品，如果开始阶段几个洗脱峰之间能够很好的分离，而末尾部分的几个组分吸附能力比较接近时，采用凸形梯度既有利于末尾部分组分的分离. 3.凹形梯度有利于改善梯度起始阶段的分辨率，如果混合样品起始部分组分吸附能力比较接近而末尾部分容易分开，采用凹形梯度能达到改善分辨率和缩短分离时间的效果。 除了梯度的形状，梯度的高度和斜率也影响着分离的速度和效果。梯度的斜率是指梯度的高度与完成此梯度时所用洗脱剂体积（或时间）的比值。 在洗脱过程中，流速会影响到待分离物质的分辨率。 谢谢大家！ 3.反离子的选择 离子交换剂处于电中性时往往带有一定的反离子。为了提高交换容量，一般应选择结合力较小的反离子。所此，强阳性和强阴性离子交换剂应分别选择H型和OH型；弱酸性和弱碱性离子交换剂应分别选择Na型和Cl型。 4.基质的选择 树脂基质是疏水性化合物，而纤维素、葡聚糖和琼脂糖基质则是亲水性化合物。在分离生物大分子时，亲水性基质交换容量高，且对生物大分子物质的吸附和洗脱都比较温和，被分离物质活性不易受到破坏。 要恰当地选择离子交换剂，必须对被分离物的性质和所处溶液组分及酸碱度等因素进行全面分析 。综合考虑上述4个方面，选择的离子交换剂才能成功地分离样品。 三、操作 1.离子交换剂的处理、再生和转型 取适量的固体离子交换剂先用水浸泡，待充分膨胀后加大量的水悬浮除去细颗粒，尔后改用酸碱浸泡，以便除去杂质和使其带上需要的反离子。疏水性离子交换剂可以用2-4倍的2mol/L NaOH或2mol/L HCl溶液处理；而亲水性离子交换剂则只能用0.5mol/L NaOH和0.5mol/L NaCl混合溶液或0.5mol/L HCl处理(室温下处理30分钟) 。酸碱处理的次序决定了离子交换剂携带反离子的类型。在每次用酸(或碱)处理后，均应先用水洗涤至近中性，再用碱(或酸)处理。末了用水洗涤至中性，经缓冲液平衡后即可使用或装柱。 使用过的离子交换剂，可采用一定的方法使其恢