小鼠杂交瘤细胞在双口滚动培养瓶中的生长及抗体分泌关.PDF

744 生物化学与生物物理进展 】rM.Biodlem.Biophys. 2001:28(5) 小鼠杂交瘤细胞在双口滚动培养瓶中的 生长及抗体分泌关 王 彦 焦鸿丽 张锦珠 赫荣乔’‘ (中国科学院生物物理研究所，视觉信息加工开放实验室，北京 100101) 摘要 研制了一种新的滚动式细胞培养装置 (rollingculruresystem)和双口滚动瓶 (double-mcwth}xlroller)利用 分泌抗人绒毛膜促性腺激素 (hCG)单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞作为检验材料，对培养在双口滚动培养装置及 常规T形瓶中的细胞生长和单抗分泌进行厂比较.在滚动培养装置中 (转速2-10r/min)培养的细胞生长和抗 体分泌皆增加30%以上_不同浓度的血清对细胞生长和抗体产量有 一定影响，含5%血清的培养液中生长的杂 交瘤细胞单抗产量最高;添加少量明胶可增加细胞生长和抗体产量. 关健词 杂交瘤，单抗分泌，细胞培养，双口滚动瓶 学科分类号 08131‘1 自1975年利用杂交瘤细胞制备单克隆抗体的 RCCS对杂交瘤细胞培养的报道.曾有人在空间微 技术建立以来川，大量的单克隆抗体已广泛应用于 重力条件下对杂交瘤细胞进行过培养实验[12,13] 科研、诊断和治疗，将杂交瘤细胞接种于小鼠腹 发现微重力能促进杂交瘤的生长速度，在太空中培 腔，从腹水中获得单抗的方法虽然抗体产量较高， 养的杂交瘤细胞生长速度与地面相比增加30%一 但由于抗体不纯且用于人类治疗受到限制而逐渐被 40%，但单克隆抗体的分泌与地面培养的对照相比 淞 卜培养所取代[21.除传统T形瓶静止培养外， 却减少了.本文作者研制的滚动培养装置和双口滚 培养方法不断更新，如:旋转或振动培养，中空纤 动培养瓶克服了单日滚动培养瓶的缺点并兼有回转 维反应器培养，透析管培养，多孔微载体培养法 细胞培养装置的某些优点[14,153 等[3-51.评价这些方法的指标主要是细胞生长、 1材料和方法 抗体产量及合理的费用等. 市售滚动培养装置实际是一种滚动架，其滚动 1.1 培养装置 培养瓶虽有不同种类，但仅为单口，并存在一定缺 新型滚动培养装置[151包括:保温培养箱体、 点:第一，通气相对不好，导致细胞生长不如双口 控制电源，滚动床、培养瓶.滚动培养瓶在可控转 培养瓶;第二，单口培养瓶在绕轴滚动过程中不平 速的机械滚动床_L以稳定的转速原位滚动，多个滚 衡而产生移动和振动，进而影响细胞生长和产物的 动培养瓶可同时在滚动床上绕圆柱长轴滚动!’61. 分泌_近年来发明的回转式细胞培养装置 (rotary 滚动培养瓶为两端开口的圆柱形瓶’4「〕. cellculturesystem.RCCSS)利用模拟微重力，使培 1.2 细胞系和培养液 养液充满容器，细胞悬浮或生长在微载体上，当培 杂交瘤细胞系36;8由小鼠P3-X63Ag8.653骨 养容器的半径和转速在一定范围内，细胞受到的离 髓细胞和Balb/C免疫hCG的B淋巴细胞融合得 心力与重力可以达到近似均衡，在这种状态下，细 到.采用低糖MFM培养液，含f万单位青链霉 胞呈三维生长.国际同行利用ROCS做了很好的工 素，用7.4%NaHO(}将pH调为7.4，依实验要 作 Freedr6〕和Falsafi等[[71成功地实现了人工牛软 求添加I%,5%和10%的胎牛血清，根据实验要 骨及人鼻软骨的建造;构建出了人工甲状腺组 织;8;和肝组织[91.一些肿瘤细胞系在RCCS中能形 国家863-2高技术肮大领域项目(863.2-7.2-16) “通讯联系人 成三维结构Uul.Lelk