干旱对小麦幼芽蛋白质组分及等电点的影响-西北农林科技大学学报.PDF

维普资讯 第25卷 第3期 西北农业太学学报 Vo】．Z5 No．3 1997年 6月 ActaUnlv．A~rlc．Boreal[-oecldema]is Jun．L997 干旱对小麦幼芽蛋 白质组分及等电点的影响 (1西西北农业业大大耍 基面辩孽 陵陵7l2l。。o。) 。’，’，，．．，， 摘 要 通过水平薄层变性聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦 (IEF)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰 胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和双向电泳(IEF×SDS)研究表明，干旱引起小麦幼芽蛋白 质组分及含量变化，主要在分子量为20~48kD、等电点(pI)为 534～565．并且干旱诱导小 麦幼芽产生41．5kD蛋白亚基．pI为 565f分子量为 36．2(pI5．35)和 15．8kD(pI5．70)的两 个蛋白亚基含量 ’ 增加 · 关键词 尘 蔓：王曼里皂垦望坌·鬯 翌·虫竖篮虫L 中圉分类号 q945．17，Q946．1 随着分子生物学、细胞生物学、分子遗传学的发展和新研究技术的建立 ，植物抗逆性 研究已逐步向细胞和分子水平发展 。有关植物逆境蛋白的研究，已取得了一些进展 。 据研究，逆境下诱导产生的蛋白质能使植物生化和结构发生变化以适应所在的环境 ，并可 能是植物抗逆性的一个共同机制 “‘有关干旱引起植物体内蛋白质代谢及组分的变化虽 有报道 。但对于冬小麦水分胁迫诱导蛋 白的研究较少 ，且均用小麦三叶期、叶片及根 系为材料。本文以单、双向电泳结合 ，并利用薄层 IEF电泳 ，分析了干旱对小麦幼芽蛋白 质组分变化的影响，研究了小麦幺虹芽等电点分布及其特点，以期为植物逆境蛋白研究奠定 基础 ，并为小麦抗旱特性 的遗传改良提供参考。 1 材料与方法 1．1 材料 冬小麦(TriticumaestivumL．)郑引 1号种子，由西北农业大学植物生理研究室提 供。 小麦种子经精选，2g／LHgCl：清毒。籽粒吸涨后置22℃温箱中催芽，露白后，选萌动 (芽长 0．10cm，根长 0．15cm)一致的种子置于培养皿中，以一1．2MPaPEG6000处理 48h，以相应量的无离子水处理为对照。 1．2 SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS—PAGE) 小麦幺虹芽蛋 白质提取液参照文献ET]。凝胶浓度为 75～150g／L线性梯度胶 。电泳操 作参照文献Es]。 1．3 双向凝胶电泳 (IEF×SDS—PAGE) 蛋白质的提取和制样参照文献 [9]，略有改动。取真空干燥后 5mg干粉，溶于等 电聚 焦尿素变性裂解液[8mol／L尿素，20g／LNp一40，体积分数为4 Ampholine，pH3．5～ 收稿 日期 1996一l1—18 课题来源 农业部 “八五 重点研究课题 作者简舟 李妮亚 ．女．1954年生，助理研究员．硬士 维普资讯 第3期 李妮亚等 干旱对小麦幼芽蛋白质组分及等电点的影响 7 10，体积分数为 5 巯基乙醇]中，离心，上清液用于电泳点样 。 电泳操作参照文献[8]方法。第一向经平衡后胶条，用浓缩胶缓l申液热溶的10g／L琼 脂糖封固于加样槽 。 标准蛋白标记胶 ，参照文献Elo3方法进行。单，双向电泳后，胶片参照文献[u]银染。 1．4 薄层聚丙烯酰胺等电聚焦(PAG—IEF) 参照文献[12]方法，略有改动，制样同双向电泳。制胶模板规格：20cmXlOcm×0．05 cm．pH梯度测定；在 LKBAmpholineP·AGplate塑料模板衬托下，按从正极端到负极端 的顺序，等距离依次切下小片，浸泡于具有双蒸水的小瓶中，用贝克曼 70型pH计测量每 瓶 内浸泡液的pH值，绘制pH梯度曲线图。 2 结果及分析 2．1 干旱对小麦幼芽蛋白质等电点分布的影响 小麦幼芽蛋白质等电聚焦结果见图1．从图1a中可 看出，在pH3．5～8．9范围内， pH值和凝胶长度线性关系良好 水平