分子流行病学研究表明.PPT

二、检测标志的选择(Selection of biomarkers) RV结构蛋白基因顺序：NH2-C-E2-E1-COOH 要从分子水平了解RV的流行规律或趋势， 必须从它的基因入手，而不能单纯从它的表型 做文章。RV的结构蛋白基因有三个即c、e2和 e1，而e1编码产物E1具有多个抗原位点，抗 原性强，是RV最重要的结构蛋白。 因此，对e1基因的核苷酸序列进行分析既 能简化实验操作程序，又能阐明RV 的基因变 异和流行规律。所以，选择e1基因的一级结构 即核苷酸序列作为测定指标。 三、测定方法(Assay methods) 如前所述，核苷酸序列分析主要有双脱氧 末端终止法和化学降解法两种。目前，多采用 前一种方法。 本研究也采用双脱氧末端终止法进行核苷 酸序列分析。 四、研究模式(Research mode) 采用分析流行病学研究，对来自三大洲的30 个 RV 分离株的重要结构基因e1区进行核苷酸序 列分析，比较分析不同地区、不同时间上的差异。 五、结果与分析(Results and analyses) RV存在两个基因型，1970年前为同一基因型， 1975年以后出现两个基因型。 基因一型包括来自北美、欧洲和日本的28个病 毒株及本室分离的JR23株；二型包括来自中国北京 和香港的2个病毒株。E1区氨基酸顺序差异不多于3%， 因此无明显的抗原变异产生。 总体上RV的核酸、氨基酸序列高度保守。中国 的四株分离株遗传性质差别相对较大，其中379株和 BRD株构成了不同其它29株的基因 Ⅱ 型，就其遗传 来源及生物学性状需进一步研究。 JR23株与英、美、日60年代流行株序列相近，其 遗传来源可能为60年代世界流行株的中国衍生株，但 具体的初始流行时间未知。 RV E1的基因与多肽序列分析 RV JR23 E1基因序列如下： GAGGAGGCTTTCACCTACCTCTGCACTGCACCGGGGTGCGCCACTCAAACACCTGTCCCCGTGCGCCTCGCTGGCGTCCGCTTTGAGTCCAAGATTGTGGACGGCGGCTGCTTTGCCCCATGGGACCTCGAGGCCACTGGAGCCTGCATTTGCGAGATCCCCACTGATGTCTCGTGCGAGGGCTTAGGGGCCTGGGTACCCACAGCCCCTTGCGCGCGCATCTGGAATGGCACACAGCGCGCGTGCACCTTCTGGGCTGTCAACGCCTACTCCTCTGGCGGGTACGCGCAGCTGGCCTCTTACTTCAACCCTGGCGGCAGCTACTACAAGCAGTACCACCCTACCGCGTGCGAGGTTGAACCTGCCTTCGGACACAGCGACGCGGCCTGCTGGGGCTTCCCCACCGACACCGTGATGAGCGTGTTCGCCCTTGCTAGCTACGTCCAGCACCCTCACAAGACCGTCCGGGTCAAGTTCCATACAGAGACCAGGACCGTCTGGCAACTCTCCGTTGCCGGCGTGTCGTGCAACGTCACCACTGAACACCCGTTCTGCAACACGCCGCACGGACAACTCGAGGTCCAGGTCCCGCCCGACCCCGGGGACCTGGTTGAGTACATTATGAATTACACCGGCAATCAGCAGTCCCGGTGGGGACTCGGGAGCCCGAATTGCCATGGCCCCGATTGGGCCTCCCCGGTTTGCCAACGCCATTCCCCTGACTGCTCGCGGCTTGTGGGGGCCACACCAGAGCGTCCCCGGCTGCGCCTGGTCGACGCCGACGACCCCCTGCTGCGCACTGCCCCTGGGCCCGGCGAGGTGTGGGTCACGCCTGTCATAGGCTCTCAGGCGCGCAAGTGCGGACTCCACATACGCGCTGGACCGTACGGCCATGCTACCGTCGAAATGCCCGAGTGGATCCACGCCCACACCACCAGCGACCCCTGGCACCCACCGGGCCCCTTGGGGCTGAAGTTCAAGACAGTTCGCCCGGTGGCCCTGCCACGCGCGTTAGCGCCACCCCGCAATGTGCGTGTGACCGGGTGCTACCAGTGCGGTACCCCCGCGCTGGTGGAAGGCCTTGCCCC