京尼平苷对巨噬细你胞上清液刺激rsc-364细胞的影响及作用机制的研究.docxVIP

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京尼平苷对巨噬细你胞上清液刺激rsc-364细胞的影响及作用机制的研究

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学, 试验材料、原始数据、申报的专利等知识 有。否则,承担相应法律责任。 研究生签名:箱冀导师签章案垓 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果, 除了文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经 发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定·本论文由本人 独立撰写,文责自负· 研究生签名: 捌 导师签章: 寒;亿 ≯l芍年6 J)p日 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 6 英文缩写 ”11 研究论文京尼平苷对巨噬细胞上清液刺激RSC一364细胞的影响及作用 机制的研究 前言刚吾 1212 材料与方法 ··13 结果 ”23 附图 27 附表 37 讨论 40 结论 44 参考文献 44 综述滑膜细胞及相关细胞因子对类风湿关节炎的影响 ”47 致谢 ..58 个人简历 59 万方数据 中文摘要京尼平苷对巨噬细胞上清液刺激RSC-364细胞的影响 中文摘要 京尼平苷对巨噬细胞上清液刺激RSC-364细胞的影响 及作用机制的研究 摘 要 目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种广泛分布于 全身的,以手、腕部小关节多发的自身免疫性疾病,其错综复杂的病因和 发病机理迄今为止仍未完全探明。该病遍布世界各地,各个种族均有发病, 世界平均患病率为1~1.5%,我国患病率为0.34%-0.36%,以女性多发, 男女比例1:3,本病在任何年龄段均可出现,以30至50岁发病最为常见。 随着病程的发展,致残率不断增加,已成为导致我国青壮年劳动力丧失的 主要疾病之一。RA的传统治疗药物主要包括非甾体类抗炎药、糖皮质激 素类药物和改善病情的抗风湿药三大类,这些药物主要用于控制和缓解疾 病症状,长期用药会产生严重的不良反应。本实验室研究报道,栀子及其 单体京尼平苷(geniposide,Ge)能够显著抑带IJCIA大鼠血清中的致炎细胞 因子IL.1p和TNF.a水平,Ge可以通过诱导细胞凋亡从而抑制C认大鼠滑膜 细胞增殖。巨噬细胞可通过分泌多种炎症介质、基质金属蛋白酶、细胞因 子和生长因子等在RA关节破坏中发挥着重要的作用。京尼平苷属于环烯 醚萜苷类化合物,又名栀子苷,主要存在于栀子、杜仲等中药植物中,其 主要作用为抗炎、抗肿瘤、抗血栓、保护神经元,此外对于骨质疏松的治 疗也有一定的疗效。本实验采用佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA) 诱导单核THP.1细胞分化为巨噬细胞,在脂多糖(1ipopo!ysaccharide,LPS) 的刺激下,巨噬细胞培养上清液造成滑膜细胞RSC.364炎症模型后,加入 不同浓度的京尼平苷,研究京尼平苷对巨噬细胞上清液刺激后RSC.364细 胞及其信号转导通路的影响,以便进一步对该药物的特性和机理进行探讨 和说明。 方法: 1佛波酯(phorbol mynstate acetate,PMA)诱导单核细胞THP.1分化 为巨噬细胞后,加入脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)刺激获取培养上清 液。 2将大鼠滑膜细胞RSC.364分为对照(培养基)组,模型(上清液) 万方数据 中文摘要组,甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)组(1xlO乇moFL),京尼平苷高(1 中文摘要 组,甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)组(1xlO乇moFL),京尼平苷高(1 xlO‘5 mol/L)、中(1x10咱mol/L)和低(1×100mol/L)三种剂量组,共六组。 采用MTT法检测滑膜细胞增殖,分别观察滑膜细胞在24h、48h和72h后的 细胞增殖率。 3将分别给药后的RSC.364滑膜细胞继续培养72h,用Hoechst 33342 和AO.PI双染分别进行细胞染色。在荧光显微镜下观察给予三种不同浓度 京尼平苷药物后凋亡和坏死的RSC.364滑膜细胞的形态学改变。 4用流式细胞仪测定对照组,模型组,MTX阳性药物组(1 xlO击 moFL),Ge高(1×10’5 mol/L)、中(1X10‘6 mol/L)、低(1xlO‘7mol/L)各 组中的RSC.364细胞中的总DNA含量并计算细胞凋亡率。 5用ELISA法分别测定对照组,模型组,MTX阳性药物组(1×10‘6 mol/L),Ge高(1xlO’5 mol/L)、中(1×10一mol/L)、低(1xlO’7m

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