晶状体上皮细胞tgf-βsmad信号转导对通路的研究.docxVIP

天津医科大学博士学位论文中文摘要 天津医科大学博士学位论文 中文摘要 目的：后囊膜混浊(Posterior capsule opaeification，PCO)是白内障术后引起视力 下降的常见并发症。晶状体上皮细胞TGF—B／Smad信号转导途径得到越来越多的 关注。本文采用RNA干扰技术，分别阻断TGF．B2／Smad2、TGF．B2／Smad3和 TGF．B2／Smad23信号转导通路。研究目的是构建Smad2和Smad3 siRNA的表 达质粒，以HLE B．3细胞为研究对象，探讨TGF．B2／Smad2和TGF—B2／Smad3信 号传导途径分别对于HLE B．3细胞增殖、迁移和细胞外基质产生的调节作用， 评价其在后囊膜混浊发生中的作用。 方法：本研究包括两部分：1．分别设计人晶状体上皮细胞的siRNA，以 pSileneer2．1．U6neo为质粒载体，构建Smad2和Smad3的siRNA表达质粒，转 化大肠杆菌，酶切、测序进行鉴定。2．体外培养HLE B．3细胞，利用siRNA分 别阻断Smad2，Smad3，Smad2和3信号传导途径。通过MTT和细胞生长曲线实 验评价细胞增殖，通过transwell和划痕实验评价细胞迁移，通过real-time PCR 评价aSMA、纤维素和I型胶原的表达。 结果：1．合成的DNA序列退火后克隆到pSileneer2．1-U6neo质粒载体上，进行 酶切、测序分析，确定为所需序列。2．阻断Smad2组MTT实验570nm光吸收 值和细胞生长曲线细胞计数TGF．B2组明显低于对照组(P0．05)，纤维素和I 型胶原表达TGF—B2组明显高于对照组(尸0．05)，aSMA表达、划痕实验细胞 迁移距离和transweU迁移细胞数TGF-B 2组与对照组没有显著性差异(乃O．05)； 阻断Smad3组aSMA表达，划痕实验细胞迁移距离和transwell迁移细胞数明显 高于对照组(尸O．05)，MTT实验570rim光吸收值，细胞生长曲线细胞计数， 纤维素和I型胶原表达TGF．62组与对照组没有显著性差异(尸0．05)。同时阻 断Smad2和Smad3组，MTT实验570nm光吸收值和细胞生长曲线细胞计数， aSMA、纤维素和I型胶原表达，划痕实验细胞迁移距离和transweU迁移细胞数 TGF一13 2组与对照组没有显著性差异(P0．05)。 结论：1．Smad2和Smad3siRNA表达质粒能有效阻断TGF．B2／Smad2、 TGF．B2／Smad3和TGF．B2／Smad23信号转导通路，及Smad2和Smad3mRNA 和蛋白的表达。2．Smad3可以阻断TGF．B2对于细胞增殖和ECM产生的调节， 阻断Smad2可以阻断TGF．B2对于细胞迁移和aSMA产生的调节。3．Smad2耗 竭可以加强Smad3的活性，Smad3耗竭可以加强Smad2的活性。4．只有阻断 天津医科大学博士学位论文Smad2和Smad3信号转导通路，才可以有效阻断TGF．B2在晶状体上皮细胞增 天津医科大学博士学位论文 Smad2和Smad3信号转导通路，才可以有效阻断TGF．B2在晶状体上皮细胞增 殖、迁移和ECM产生的调节作用。从而有效阻断PCO的形成。 关键词：RNA干扰晶状体上皮细胞后囊膜混浊TGF-B Smad II 天津医科大学博士学位论文Abstr 天津医科大学博士学位论文 Abstr act Objective：Posterior c印sule opacification(PCO)is the most common post-operative complication of cataract surgery causing visual loss．Currently,increasing attention is directed at the TGF—B／Smad signaling pathways in lens epithelial cells．The signaling pathway of TGF—B2／Smad plays nil important role in the pathological process in posterior capsule opacification after cataract surgery．Smad2 and Smad3 are both receptor-regulated Smads(R—Smads)of the TGF-B2 signaling pathway．We used RNA interference technique to inhibit TGF—B2／Smad signaling pathway．We