医学微慢生物学
找答案?;前言;核酸的分类:
DNA
核内染色体 DNA。
核外也有少量DNA,如线粒体DNA,叶绿体DNA。
质粒DNA。
RNA
存在于细胞质中,如mRNA, rRNA, tRNA等。
除上述DNA,RNA外,还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体,其或只含DNA,或只含有RNA。;主要内容;1. 核酸分离与纯化的原则及要求;1.2 核酸分离与纯化的要求
(1) 为保证核酸的完整性,
(防止降解),在实验中应注意:
尽量简化步骤,缩短提取时间,减少各种有害因素对核酸的破坏。
减少化学因素对核酸的降解,pH4-10。
;防止核酸的生物降解(细胞内或外的各种核酸酶水解)。
所用器械和一些试剂需高压灭菌,提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。操作温度为0~4℃。
DNA酶需要金属离子Mg2+、Ca2+的激活,因此使用金属离子螯合剂,如EDTA或柠檬酸盐等;阴离子表面活性剂SDS。
RNA酶分布广泛,极易污染样品,而且耐高温、耐酸碱、不易失活,生物降解是RNA提取过程中的主要危害因素。0.1%DEPC浸泡,器械180℃干烤8h。
;减少物理因素对核酸的降解,主要是机械剪切力,其次是高温。
机械剪切力包括强力高速的振荡、突然暴露于低渗液、样品反复冻融等。
高温,如长时间的煮沸。
;(2) 核酸纯度的要求:
非核酸生物大分子的污染降低到最低程度,如蛋白质、多糖和脂类分子;
排除其它核酸
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