解淀粉芽孢杆菌barnase-barstar分子调控系统中的构建及在烟草花发育调控中的应用研究.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者：替凋刁 日期： Ⅻ／午年6月J吾日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑卅I大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者：搠面 日期： 印／仁年‘月／害日 中文摘要中文摘要 中文摘要 中文摘要 Barnase是一种来源于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的细胞致 死因子，Barstar是Barnase的抑制因子，barnase—barstar构成一对分子开关可以 应用于基因表达调控研究。barnase在花序分生组织中由花序分生组织特异启动 子AtREMl启动表达能够使花序分生组织细胞死亡从而抑制植物开花，使植物不 能进入生殖生长而长期处于营养生长状态。barstar的表达可以阻止barnase的致 死作用，从而使植物恢复其育性进入生殖生长状态产生种子。Barstar由一个嵌 合启动子MRE35S90启动，该基因的表达受到人工施加化学诱导剂铜离子的控 制，当无化学诱导剂时该基因并不转录表达，当人工添加诱导剂时，该诱导剂 与诱导剂作用基因acel结合，从而使响应启动子启动barstar的表达。 本试验所构建的植物生殖器官调控系统可以在特定的时间和空间进行表 达，可以根据人们不同的需要来进行人工控制。 本试验通过培养解淀粉芽孢杆菌，提取基因组，设计引物，通过PCR的技 术手段获得了目的基因barnase及其抑制基因barstar；通过种植培养野生型拟南 芥(Arabidopsis thaliana)，并通过提取其总基因组DNA，设计目的基因引物， 获得花序分生组织特异型启动子AtREMl启动barnase的表达；通过培养野生豌 豆(Vicia Linn)，提取总基因组，设计引物，得到豌豆rbcs 3A终止子；培养农 杆菌通过PCR手段获得NOS终止子；培养酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 通过PCR获得acel基因；人工合成MRE35S90启动子和CaMV35S启动子分别 启动barstar和acel的表达。 将获得的各基因组合获得重组表达质粒命名为RBCu，并将该重组质粒转化 根癌农杆菌LBA4404，使用农杆菌侵染法转化优质烟草品种NC89从而获得转基 因烟草。 转基因烟草的检测采用抗除草剂的筛选、普通PCR检测目的基因、Southern blot检测以及实时荧光定量PCR目的基因拷贝数等技术手段，从而在整合水平、 转录水平和表达水平上对目的基因进行检测。 论文试验完成了解淀粉芽孢杆菌bamase．barstar调控系统的克隆，并构建了 植物花发育受阻系统以及化学诱导植物花发育受阻恢复系统，证实了该分子调 控系统的有效性。将该系统应用于其他植物中可以达到保护环境和提高经济作 中文摘要物或农作物产量的目的，在一定程度上推动经济的发展和人类社会的可持续发 中文摘要 物或农作物产量的目的，在一定程度上推动经济的发展和人类社会的可持续发 展。 关键词解淀粉芽孢杆菌；barnase；barstar；AtREMl启动子；acel；植物 生殖器官发育调控 II AbstractAbstract Abstract Abstract Barnase is a cell lethal factor derived from Bacillus amyloliquefaciens，this gene expression in the inflorescence meristem and stated by the inflorescence meristem promoter can kill the cells SO inhibiting plants flowing，then the plant Can not enter the reproductive growth and long—term in nutrit