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荧光定等量pcr
北京康为世纪生物科技有限公司;内 容;microRNA;
长度20~24nt 单链小分子RNA
与目标基因3’端非编码区的识别位点相结合
导致目标基因mRNA分子稳定性下降,半衰期变短,或mRNA分子结构变化(5‘脱帽),从而表达水平下降。
;microRNA 的来源;miRNA前体与成熟体;靶点识别–不严格互补配对;miRNA 与 siRNA的异同;miRNA siRNA;miRNA 检测与定量;miRNA芯片–基因表达谱 ;;Pre-miRNA检测;Specific miRNA quantification by real time PCR – way to go;解决miRNA丰度难题 ; M 1 2 3;成熟 miRNA qPCR检测- Poly(A)加尾法;成熟 miRNA qPCR检测 – 茎环法;检测方法选择;康为miRNA产品;康为miRNA检测服务;(Real time Quantitative PCR);PCR:伟大的天才发明;PCR:理想与现实;扩增曲线 -- Ct值:
模板DNA量越多,荧光强度达到检测域值所需的循环数越少,
即Ct值越??。
;Real-time PCR: 检测原理;; Taqman 工作原理; 染料法与探针法 对比;Real-time PCR 应用; 基因表达分析检测; 内参基因的选择;Housekeeping Gene 康为产品;基因表达分析检测;样本处理与RNA提取; RT-qPCR一步法还是两步法?; 逆转录;总原则与普通PCR相同:
避免引物二聚体,避免二级结构
扩增片段长度(80 – 300 bp)
推荐做跨intron设计;反应条件优化;反应条件优化;;反应条件优化; Master Mix的应用;Master Mix的应用;
误差控制
使用Master mix
配置预混体系
设置生物学重复
(不同个体)
技术性重复(复孔)
阴性对照
;2-ΔΔ Ct法;Trouble shooting; 荧光定量产品--染料法;荧光定量产品--染料法;康为世纪产品
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