日本血吸虫脂筏蛋白的重组表达及其生物信息学分析-热带病与寄生虫学.PDF

热带病与寄生虫学２０１８年第１６卷第２期 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒｏｐｉｃａｌＤｉｓｅａｓｅｓａｎｄＰａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ２０１８Ｖｏｌ１６Ｎｏ２ ·６７· ｄｏｉ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１６７２－２３０２２０１８０２００２ ·论著 · 日本血吸虫脂筏蛋白的重组表达 及其生物信息学分析 田添　王培　吕超　秦志强 【摘要】目的 在大肠杆菌中原核表达、纯化日本血吸虫脂筏蛋白（ｒＳｊＦＬＯＴＩＬＬＩＮ２），并对其进行生物信 息学分析。方法 以日本血吸虫成虫ｃＤＮＡ为模板扩增ＦＬＯＴＩＬＬＩＮ２基因片段，克隆至ｐＥＴ２８ａ（＋）质粒，经 ＸｈｏＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切以及测序鉴定；重组质粒再转化入Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１，含重组质粒的菌株经ＩＰＴＧ诱导表达， 采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定目的蛋白分子量大小。同时采用生物信息学分析方法进行了序列比 较和进化树分析。结果 重组质粒（ｐＥＴ２８ａ－ＦＬＯＴＬＬＩＮ２）经双酶切及测序鉴定，证明插入片段序列与预期 目的基因序列符合。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，体外原核表达的重组蛋白（ｒＳｊＦＬＯＴＩＬＬＩＮ２）分子 量大小为４８ｋＤ，其与预测的分子量大小一致。经Ｂｌａｓｔ搜索比对发现，日本三角涡虫、白纹伊蚊、地中海果 蝇、苜蓿切叶蜂等ＦＬＯＴＩＬＬＩＮ２序列与日本血吸虫ＦＬＯＴＩＬＬＩＮ２相似性最高；将日本血吸虫和热带爪蟾、原鸡 等１５种不同物种来源的ＦＬＯＴＩＬＬＩＮ２编码蛋白进行比较，并构建ＦＬＯＴＩＬＬＩＮ２系统进化树，系统发育分析结 果显示，日本血吸虫与涡虫同为一支，遗传距离最为接近。结论 日本血吸虫脂筏蛋白基因被成功克隆和表 达，为进一步研究打下基础。 【关键词】日本血吸虫；脂筏蛋白；重组表达；生物信息学 ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｊａｐｏｎｉｃｕｍｆｌｏｔｉｌｌｉｎ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｉｔｓｂｉｏ－ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓ　ＴｉａｎＴｉａｎ，Ｗａｎｇ  Ｐｅｉ，ＬｖＣｈａｏ，ＱｉｎＺｈｉｑｉａｎｇ．ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰａｒａｓｉｔｉｃＤｉｓｅａｓｅｓ，ＣｈｉｎｅｓｅＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｉｓｅａｓｅｓＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ， Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００２５，Ｃｈｉｎａ； ＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇＡｕｔｈｏｒ．  【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｃｌｏｎｅ，ｅｘｐｒｅｓｓａｎｄｐｕｒｉｆｙＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｊａｐｏｎｉｃｕｍｆｌｏｔｉｌｌｉｎ２（ＳｊＦＬＯＴＩＬＬＩＮ２）ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，ａｎｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＦｌｏｔｉｌｌｉｎ２ｇｅｎｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙ ＰＣＲｕｓｉｎｇｃＤＮＡｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍａｄｕｌｔＳｃｈｉｓｔｏｍａｊａｐｏｎｉｃｕｍ．ＴｈｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｒｏｄｕｃｔｗａｓｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄｉｎｔｏｐＥＴ２８ａ （＋）ｐｌａｓｍｉｄ，ａｎｄｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｄｏｕｂｌｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｗｉｔｈＸｈｏＩａｎｄＥｃｏＲＩ，ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｃｏｍ ｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｗａｓｔｈｅｎｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１ｔｏｉｎｄｕｃｅｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｉｔｈＩＰＴＧ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｏｆｔｈｅｉｎｔｅｒｅｓｔｐｒｏｔｅｉｎ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｗａｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅａｎｄｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＦＬＯＴＩＬＬＩＮ２ａｎｄｉｔｓｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅ．ＲｅｓｕｌｔｓＳｊＦＬＯＴＩＬＬＩＮ２ｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙ ＰＣＲ，ａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙＸｈｏＩａｎｄＥｃｏＲＩｄｏｕｂｌｅｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｏｆｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｗａｓ４８ＫＤ，ｉｄｅｎｔｉｃａｌｗｉｔｈｔｈｅｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｓｉｚｅ．Ｆｕｒｔｈｅｒ